RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)到底怎樣才能養(yǎng)好它呢？它太容易分化了！

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2021-12-09

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養(yǎng)好RAW 264.7的第一步，是要對(duì)它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長(zhǎng)特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。

　　養(yǎng)過(guò)RAW 264.7的小伙伴，
　　都容易為一個(gè)問(wèn)題感到苦惱：
　　它太容易分化了！
　　到底怎樣才能養(yǎng)好它呢？
　　今天就給大家分享一些心得。
　　養(yǎng)好RAW 264.7之基礎(chǔ)篇
　　養(yǎng)好RAW 264.7的第一步，是要對(duì)它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長(zhǎng)特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。
　　細(xì)胞名稱
　　RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
　　細(xì)胞別稱
　　RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
　　種屬
　　小鼠（雄性，成年BALB/c鼠）
　　組織來(lái)源
　　Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤
　　生長(zhǎng)特性
　　貼壁細(xì)胞
　　細(xì)胞形態(tài)
　　不規(guī)則形（圓形、短梭形）
　　生長(zhǎng)培養(yǎng)基
　　DMEM＋10% FBS＋1% P/S
　　培養(yǎng)環(huán)境
　　氣相：95%空氣；5%CO2 溫度：37℃
　　推薦傳代比例
　　1:3 - 1:6
　　凍存液配方
　　55% DMEM 40% FBS 5% DMSO
　　
　　▲RAW 264.7生長(zhǎng)圖片
　　養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇1
　　除了基礎(chǔ)條件，其他外界因素也容易引起細(xì)胞的“小脾氣”，比如運(yùn)輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對(duì)幾種常見(jiàn)的問(wèn)題，來(lái)一一為大家解答。
　　問(wèn)題1 ：收貨后，細(xì)胞不見(jiàn)了
　　總是會(huì)收到這類反饋：收到細(xì)胞，期待值滿滿地打開(kāi)包裝，但在顯微鏡下卻找不到細(xì)胞！
　　這是因?yàn)镽AW 264.7 細(xì)胞貼壁較松，快遞運(yùn)輸路上受到顛簸，可能會(huì)脫落。脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。
　　這時(shí)候不用擔(dān)心，把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置兩個(gè)小時(shí)就可以看到了。
　　如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少，請(qǐng)將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細(xì)胞。
　　細(xì)胞全部脫落，慌亂之下可能會(huì)一個(gè)細(xì)胞都找不著。這個(gè)時(shí)候離心驗(yàn)證是最好的方法。
　　問(wèn)題2 ：收貨處理后，細(xì)胞不貼壁
　　將細(xì)胞離心收集，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞放到新的培養(yǎng)瓶里之后，可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)漂浮、不貼壁的情況。
　　這種情況下，把細(xì)胞離心收集，用1mL培養(yǎng)基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。
　　RAW 264.7脫落后傾向于抱團(tuán)，抱團(tuán)時(shí)細(xì)胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞，不然細(xì)胞很難重新貼壁。
　　養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇2
　　正確的傳代方法是養(yǎng)好RAW 264.7的關(guān)鍵，每一步操作都要細(xì)致入微，稍有不慎細(xì)胞就分化了。
　　RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實(shí)驗(yàn)室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。
　　在養(yǎng)RAW 264.7細(xì)胞這十幾年里，摸索出一個(gè)更不錯(cuò)的方法：吹打傳代。
　　吹打傳代操作簡(jiǎn)單，對(duì)養(yǎng)細(xì)胞的萌新們更友好，也能更好地控制細(xì)胞分化率。
　　吹打傳代步驟
　　01 輕拍幾下培養(yǎng)皿
　　02 用1ml 的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來(lái)（吹不下來(lái)的舍棄）
　　03 細(xì)胞吹下來(lái)后轉(zhuǎn)移到15ml離心管
　　04 1200rpm(約250g) 離心3min
　　05 去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞
　　06 按比例接種到新的培養(yǎng)皿中

　　吹打傳代時(shí)機(jī)
　　01 吹打傳代時(shí)機(jī)
　　02 當(dāng)細(xì)胞密度較低的時(shí)候，可能不太好吹下來(lái)。
　　03 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時(shí)候，最容易吹下。
　　
　　▲推薦傳代的密度
　　養(yǎng)好RAW 264.7之終結(jié)篇
　　講了那么多如何處理RAW 264.7分化的情況，那分化了的細(xì)胞到底是什么形態(tài)呢？
　　
　　分化的RA264.7
　　分化的細(xì)胞呈多角形，體積明顯增大，時(shí)常有較長(zhǎng)的黑色觸角。
　　注意事項(xiàng)
　　1 RAW 264.7細(xì)胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；
　　2 分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時(shí)候請(qǐng)勿強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；
　　3 吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；
　　4 細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時(shí)RAW 264.7 會(huì)出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細(xì)胞都貼壁較松，此時(shí)更適宜用巴氏管吹打；
　　5 培養(yǎng)時(shí)，無(wú)法保證100% 不分化，通過(guò)傳代可以將分化比例控制在一定范圍；
　　6 RAW 264.7分裂活躍，記得每天看一看，周末也要抽點(diǎn)時(shí)間關(guān)心一下它哦~
　　養(yǎng)細(xì)胞不易，每個(gè)細(xì)胞對(duì)我們而言，都像是寶寶，含在嘴里怕化了，捧在手里怕摔了。
　　正是因?yàn)閷?duì)科研的無(wú)畏堅(jiān)持，讓我們更有力量接受考驗(yàn)，因?yàn)榭蒲斜旧恚档镁次泛透冻觥?br /> 　　
　　RAW 264.7的起源
　　加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系。
　　他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且能通過(guò)抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。
　　RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測(cè)到病毒），對(duì)LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。