RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)到底怎樣才能養(yǎng)好它呢？它太容易分化了！

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2021-12-09

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養(yǎng)好RAW 264.7的第一步，是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。

　　養(yǎng)過RAW 264.7的小伙伴，
　　都容易為一個問題感到苦惱：
　　它太容易分化了！
　　到底怎樣才能養(yǎng)好它呢？
　　今天就給大家分享一些心得。
　　養(yǎng)好RAW 264.7之基礎(chǔ)篇
　　養(yǎng)好RAW 264.7的第一步，是要對它的基礎(chǔ)培養(yǎng)條件了如指掌，比如生長特性、細(xì)胞形態(tài)、所需的培養(yǎng)基，甚至培養(yǎng)環(huán)境、傳代比例等等，做到知己知彼，才能百戰(zhàn)百勝。
　　細(xì)胞名稱
　　RAW 264.7 (小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)
　　細(xì)胞別稱
　　RAW264; RAW2647; RAW 264.7; RAW-264.7; Raw 264.7; RAW 264.7
　　種屬
　　小鼠（雄性，成年BALB/c鼠）
　　組織來源
　　Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤
　　生長特性
　　貼壁細(xì)胞
　　細(xì)胞形態(tài)
　　不規(guī)則形（圓形、短梭形）
　　生長培養(yǎng)基
　　DMEM＋10% FBS＋1% P/S
　　培養(yǎng)環(huán)境
　　氣相：95%空氣；5%CO2 溫度：37℃
　　推薦傳代比例
　　1:3 - 1:6
　　凍存液配方
　　55% DMEM 40% FBS 5% DMSO
　　
　　▲RAW 264.7生長圖片
　　養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇1
　　除了基礎(chǔ)條件，其他外界因素也容易引起細(xì)胞的“小脾氣”，比如運(yùn)輸路上的顛簸、傳代方法等等。針對幾種常見的問題，來一一為大家解答。
　　問題1 ：收貨后，細(xì)胞不見了
　　總是會收到這類反饋：收到細(xì)胞，期待值滿滿地打開包裝，但在顯微鏡下卻找不到細(xì)胞！
　　這是因為RAW 264.7 細(xì)胞貼壁較松，快遞運(yùn)輸路上受到顛簸，可能會脫落。脫落的細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中不容易聚焦。
　　這時候不用擔(dān)心，把細(xì)胞放進(jìn)培養(yǎng)箱靜置兩個小時就可以看到了。
　　如果靜置后看到的細(xì)胞仍偏少，請將瓶子里的培養(yǎng)基都轉(zhuǎn)移到離心管里，1200rpm（約250g）離心3分鐘，即可看到沉淀的細(xì)胞。
　　細(xì)胞全部脫落，慌亂之下可能會一個細(xì)胞都找不著。這個時候離心驗證是最好的方法。
　　問題2 ：收貨處理后，細(xì)胞不貼壁
　　將細(xì)胞離心收集，用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞放到新的培養(yǎng)瓶里之后，可能會出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)漂浮、不貼壁的情況。
　　這種情況下，把細(xì)胞離心收集，用1mL培養(yǎng)基重懸，慢慢地，輕輕地吹打，直到細(xì)胞被吹成單細(xì)胞，就可以重新鋪板了。
　　RAW 264.7脫落后傾向于抱團(tuán)，抱團(tuán)時細(xì)胞是活著的，但很難貼壁。記得一定要把聚成團(tuán)的細(xì)胞吹散成單細(xì)胞，不然細(xì)胞很難重新貼壁。
　　養(yǎng)好RAW 264.7之進(jìn)階篇2
　　正確的傳代方法是養(yǎng)好RAW 264.7的關(guān)鍵，每一步操作都要細(xì)致入微，稍有不慎細(xì)胞就分化了。
　　RAW 264.7不能用胰酶消化，許多實驗室用細(xì)胞刮傳代，這是一種非常經(jīng)典好用的方法。
　　在養(yǎng)RAW 264.7細(xì)胞這十幾年里，摸索出一個更不錯的方法：吹打傳代。
　　吹打傳代操作簡單，對養(yǎng)細(xì)胞的萌新們更友好，也能更好地控制細(xì)胞分化率。
　　吹打傳代步驟
　　01 輕拍幾下培養(yǎng)皿
　　02 用1ml 的槍或者巴氏管把細(xì)胞吹下來（吹不下來的舍棄）
　　03 細(xì)胞吹下來后轉(zhuǎn)移到15ml離心管
　　04 1200rpm(約250g) 離心3min
　　05 去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞
　　06 按比例接種到新的培養(yǎng)皿中

　　吹打傳代時機(jī)
　　01 吹打傳代時機(jī)
　　02 當(dāng)細(xì)胞密度較低的時候，可能不太好吹下來。
　　03 當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%的時候，最容易吹下。
　　
　　▲推薦傳代的密度
　　養(yǎng)好RAW 264.7之終結(jié)篇
　　講了那么多如何處理RAW 264.7分化的情況，那分化了的細(xì)胞到底是什么形態(tài)呢？
　　
　　分化的RA264.7
　　分化的細(xì)胞呈多角形，體積明顯增大，時常有較長的黑色觸角。
　　注意事項
　　1 RAW 264.7細(xì)胞三天不傳代更容易分化，很難吹下，每一次接種密度都要控制好；
　　2 分化的細(xì)胞貼壁牢固，傳代的時候請勿強(qiáng)制性吹下這些細(xì)胞，只接種容易吹下的那些未分化細(xì)胞；
　　3 吹打的力度一定要輕，切勿暴力吹打；
　　4 細(xì)胞的貼壁性和培養(yǎng)器皿的材料也有關(guān)，有時RAW 264.7 會出現(xiàn)太容易吹下的情況，連分化細(xì)胞都貼壁較松，此時更適宜用巴氏管吹打；
　　5 培養(yǎng)時，無法保證100% 不分化，通過傳代可以將分化比例控制在一定范圍；
　　6 RAW 264.7分裂活躍，記得每天看一看，周末也要抽點(diǎn)時間關(guān)心一下它哦~
　　養(yǎng)細(xì)胞不易，每個細(xì)胞對我們而言，都像是寶寶，含在嘴里怕化了，捧在手里怕摔了。
　　正是因為對科研的無畏堅持，讓我們更有力量接受考驗，因為科研本身，值得敬畏和付出。
　　
　　RAW 264.7的起源
　　加利福尼亞索爾克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV（Abelson鼠科白血病病毒）誘發(fā)腫瘤的腹水中建立了RAW 264細(xì)胞系。
　　他發(fā)現(xiàn)RAW 264可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且能通過抗體依賴途徑分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。
　　RAW 264.7不分泌A-MuLV（但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清檢測到病毒），對LPS非常敏感。該研究1978年發(fā)表在《CELL》雜志。