疾病相關(guān)基因穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建

服務(wù)概述

　　穩(wěn)轉(zhuǎn)株是指通過基因編輯獲得穩(wěn)定過表達(dá)或抑制特定基因的細(xì)胞株。將疾病相關(guān)基因序列或抑制目的基因的shRNA序列裝載至重組載體，通過慢病毒篩選系統(tǒng)或轉(zhuǎn)座子篩選系統(tǒng)將目的基因的序列整合至宿主細(xì)胞的染色體中，實(shí)現(xiàn)目的基因持續(xù)、穩(wěn)定的表達(dá)與調(diào)控。包括過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株、敲低穩(wěn)轉(zhuǎn)株和適應(yīng)癥疾病基因穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

服務(wù)內(nèi)容

　　采用慢病毒藥篩系統(tǒng)“慢病毒感染——藥物篩選法”or通過轉(zhuǎn)座子篩選系統(tǒng)進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的構(gòu)建，包括構(gòu)建過表達(dá)穩(wěn)轉(zhuǎn)株、敲低穩(wěn)轉(zhuǎn)株或疾病相關(guān)基因穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

服務(wù)流程

　　一、慢病毒篩選系統(tǒng)
　　1、目的基因篩選
　　生信篩選目的基因或選擇適應(yīng)癥的靶點(diǎn)基因；
　　2、細(xì)胞株選擇
　　細(xì)胞株類型盡量選擇和所研究的適應(yīng)癥一致，例如研究的適應(yīng)癥為肝癌，可選擇相應(yīng)的肝癌細(xì)胞系進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建，這樣構(gòu)建的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞也可以用于下游的體內(nèi)抗腫瘤活性評價實(shí)驗(yàn)。通過QPCR和WB檢測細(xì)胞系基因表達(dá)，根據(jù)細(xì)胞系中基因表達(dá)情況，選擇需要構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)目的基因的細(xì)胞株。
　　另外，如果做藥物與靶點(diǎn)之間的相互作用關(guān)系，可以選擇293T和CHO-K1這一類比較常用的工具細(xì)胞，這類細(xì)胞容易被慢病毒感染，因此容易獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞，節(jié)省時間成本。
　　3、構(gòu)建載體
　　將目的基因CDs區(qū)序列或抑制目的基因的shRNA序列裝載至重組載體；
　　4、慢病毒包裝質(zhì)粒提取
　　5、病毒包裝
　　慢病毒質(zhì)粒共轉(zhuǎn)到293T細(xì)胞中，通過慢病毒包裝系統(tǒng)進(jìn)行病毒包裝；
　　6、病毒感染
　　設(shè)置不同梯度MOI，篩選最佳MOI；
　　7、抗性篩選
　　常用的真核表達(dá)載體的抗性篩選標(biāo)志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）、嘌呤霉素(puromycin)和G418遺傳霉素(Geneticin)?，針對序列不同抗性選擇不同的抗生素對細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選；
　　8、構(gòu)建多克隆/單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)株；
　　9、穩(wěn)轉(zhuǎn)株表達(dá)驗(yàn)證
　　10、交付實(shí)物
　　T25細(xì)胞瓶或凍存管，1到2*10^6個cells。
慢病毒篩選示意圖
　　二、轉(zhuǎn)座子篩選系統(tǒng)
　　1、目的基因篩選
　　生信篩選目的基因或選擇適應(yīng)癥的靶點(diǎn)基因；
　　2、構(gòu)建載體與質(zhì)粒提取
　　3、轉(zhuǎn)座酶質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座序列質(zhì)粒共轉(zhuǎn)
　　轉(zhuǎn)座酶質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座序列質(zhì)粒共轉(zhuǎn)細(xì)胞；
　　4、抗生素篩選
　　常用的真核表達(dá)載體的抗性篩選標(biāo)志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）、嘌呤霉素(puromycin)和G418遺傳霉素(Geneticin)?，針對序列不同抗性選擇不同的抗生素進(jìn)行藥物篩選；
　　5、單克隆
　　單克隆化擴(kuò)增培養(yǎng)細(xì)胞；
　　6、檢測目的基因序列是否轉(zhuǎn)座進(jìn)基因組
轉(zhuǎn)座子篩選示意圖

服務(wù)優(yōu)勢

　　1、一站式服務(wù)
　　我司細(xì)胞庫有800株以上細(xì)胞株，資源種子齊全。提供產(chǎn)品全流程服務(wù)，省事省心；
　　2、技術(shù)成熟
　　通過“慢病毒感染——藥物篩選法”構(gòu)建成功的穩(wěn)轉(zhuǎn)株達(dá)500株以上，傳代后穩(wěn)定表達(dá)；通過轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)構(gòu)建成功的穩(wěn)轉(zhuǎn)株已用于多個層面研究；
　　3、多種穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選系統(tǒng)可供選擇；
　　4、時間保證
　　從質(zhì)粒構(gòu)建到多克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)株交付，3-4個月；從質(zhì)粒構(gòu)建到單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)株交付，4-6個月；
　　5、質(zhì)量保障
　　保證細(xì)胞株無支原體衣原體感染；
　　6、提供專業(yè)技術(shù)指導(dǎo)
　　技術(shù)團(tuán)隊(duì)平均技齡6年以上，提供專業(yè)培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)；
　　7、售后無憂
　　2周無責(zé)售后，無后顧之憂。