吉妮歐類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型背景的建立模型詳細(xì)介紹

發(fā)布時間：

2022-03-07

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類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型的建立,其基本病理改變是滑膜炎，急性期滑膜腫脹、滲出，中性粒細(xì)胞浸潤；慢性期滑膜增生肥厚，形成血管翳；后者是造成關(guān)節(jié)破壞、關(guān)節(jié)畸形、功能障礙、使疾病進入不可逆階段的病理基礎(chǔ)

　　類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎動物模型的建立
　　類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎、破壞性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕卣鞯穆?、自身免疫性疾病，致畸、致殘率極高。（推薦閱讀：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)模型、MH7A類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞、HFLS-RA人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞）
　　其臨床癥狀主要表現(xiàn)為全身關(guān)節(jié)腫脹、疼痛和運動失調(diào)等、病情及其嚴(yán)重的甚至可能導(dǎo)致殘疾。
　　其基本病理改變是滑膜炎，急性期滑膜腫脹、滲出，中性粒細(xì)胞浸潤；慢性期滑膜增生肥厚，形成血管翳；后者是造成關(guān)節(jié)破壞、關(guān)節(jié)畸形、功能障礙、使疾病進入不可逆階段的病理基礎(chǔ)。

　　發(fā)病機制
　　RA 是一種復(fù)雜的免疫性疾病，致病機理目前還沒有完全了解。
　　目前多認(rèn)為本病屬于一種自身免疫性疾病，其始動因子尚不清楚，可能是感染因子（如病毒、支原體或細(xì)菌等）進入人體后，其所含某些成分（如寡糖或糖肽碎片）被關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜細(xì)胞攝取并組合到滑膜細(xì)胞所合成的蛋白多糖中，使其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變而具抗原性。
　　此外還和遺傳因素有關(guān)，已發(fā)現(xiàn) RA 的易感基因。
　　目的
　　為探明類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）的病因、病理學(xué)、免疫學(xué)、臨床等方面的機制，尋找更有效的治療 RA 的方案。
　　因此探尋一種與人類 RA 相似、容易建立、比較經(jīng)濟的并且能全面反映 RA 特點的動物模型是一種必要的手段

　　（一）佐劑誘導(dǎo)型（Adjuvant Arthritis, AA）（推薦閱讀：佐劑性誘導(dǎo)節(jié)炎（AIA）嚙齒動物模型）
　　AA 最早由細(xì)菌學(xué)家Freund 于20 世紀(jì)50 年代創(chuàng)立，又稱為弗氏佐劑關(guān)節(jié)炎。通常用完全弗氏佐劑（CFA）作介導(dǎo)溶劑。
　　其機制是結(jié)核桿菌致關(guān)節(jié)炎抗原為 65 kD 熱休克蛋白(HSP)，RA病人軟骨內(nèi)具有與 65kD HSP 相似的蛋白多糖橋聯(lián)蛋白抗原成分，CFA 注入激活T細(xì)胞，激活T細(xì)胞參與 RA 發(fā)病機制。

　?。ǘ┠z原誘導(dǎo)型（collagen-induced arthritis，CIA）（推薦閱讀：膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎（CIA）嚙齒動物模型）
　　CIA 模型是由Trentham等于1977年首次建立的實驗性關(guān)節(jié)炎動物模型。
　?、蛐湍z原蛋白與完全弗氏佐劑（CFA）混合至完全乳化，制備Ⅱ型膠原乳劑對動物進行免疫。
　　其建模機制是 50％的RA患者血清中存在有抗CⅡ的自身抗體，表明CⅡ可誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生關(guān)節(jié)炎性質(zhì)的自身免疫反應(yīng)。

　?。ㄈ┠z原抗體誘導(dǎo)型(CAIA)
　　抗Ⅱ型膠原單克隆抗體源自8周大的雄性DBA/1J 小鼠CIA 模型，這些抗體混合物注射到模型小鼠的關(guān)節(jié)腔后可直接作用于Ⅱ型膠原或其他在體內(nèi)高表達(dá)的自身抗原，從而發(fā)揮免疫介導(dǎo)作用。
　　該模型的臨床癥狀與CIA和RA很相似，突出特點是能在幾天之內(nèi)迅速發(fā)病，關(guān)節(jié)組織中巨噬細(xì)胞和多核型白細(xì)胞浸潤。該模型很好的體現(xiàn)了外源性抗原抗體刺激體誘導(dǎo)的嚴(yán)重關(guān)節(jié)損傷。

　?、蛐湍z原乳劑制備
　　用高速勻漿機機器攪拌按照佐劑和膠原溶液（1：1），加入順序是把水溶液加到油溶液中去，攪拌中逐滴加入。
　　模型構(gòu)建成功展示
　　總結(jié)
　　為減少震蕩過程中發(fā)熱導(dǎo)致的膠原變性，可在管子外面再套一個裝有有冰水混合物的管子。攪拌時間為2min左右。
　　膠原佐劑劑配成乳劑后一定要檢測乳劑的質(zhì)量，乳化后的膠原滴入水中不擴散才能進行免疫，如果滴入水中擴散說明乳化效果不好，影響造模效果。乳劑現(xiàn)配現(xiàn)用，乳劑保存時間不超過1小時。

　　足墊免疫
　　針頭應(yīng)插入足墊皮下指向腳踝方向：這樣能夠保證佐劑引流到淋巴結(jié)。30min內(nèi)會看到嚴(yán)重的急性炎癥反應(yīng)，高峰期3-4天，通常情況下回持續(xù)20-25天。
　　免疫的后爪不能作為評分標(biāo)準(zhǔn)，因為即使其四肢都沒有腫脹，免疫的后爪也會發(fā)生腫脹。
　　免疫后12-14天在未注射的爪子發(fā)生腫脹，高峰期2-3天，關(guān)節(jié)炎會持續(xù)20-25天。但是有一些大鼠會反生由骨膜反應(yīng)引起的慢性骨性肥大。