吉妮歐類風濕性關節炎動物模型背景的建立模型詳細介紹
發布時間：
2022-03-07
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類風濕性關節炎動物模型的建立
類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以關節滑膜炎、破壞性關節病變為主要特征的慢性、自身免疫性疾病，致畸、致殘率極高。（推薦閱讀：類風濕性關節炎(RA)模型、MH7A類風濕關節炎滑膜成纖維細胞、HFLS-RA人類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞）
其臨床癥狀主要表現為全身關節腫脹、疼痛和運動失調等、病情及其嚴重的甚至可能導致殘疾。
其基本病理改變是滑膜炎，急性期滑膜腫脹、滲出，中性粒細胞浸潤；慢性期滑膜增生肥厚，形成血管翳；后者是造成關節破壞、關節畸形、功能障礙、使疾病進入不可逆階段的病理基礎。
發病機制
RA 是一種復雜的免疫性疾病，致病機理目前還沒有完全了解。
目前多認為本病屬于一種自身免疫性疾病，其始動因子尚不清楚，可能是感染因子（如病毒、支原體或細菌等）進入人體后，其所含某些成分（如寡糖或糖肽碎片）被關節內滑膜細胞攝取并組合到滑膜細胞所合成的蛋白多糖中，使其結構發生改變而具抗原性。
此外還和遺傳因素有關，已發現 RA 的易感基因。
目的
為探明類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）的病因、病理學、免疫學、臨床等方面的機制，尋找更有效的治療 RA 的方案。
因此探尋一種與人類 RA 相似、容易建立、比較經濟的并且能全面反映 RA 特點的動物模型是一種必要的手段
（一）佐劑誘導型（Adjuvant Arthritis, AA）（推薦閱讀：佐劑性誘導節炎（AIA）嚙齒動物模型）
AA 最早由細菌學家Freund 于20 世紀50 年代創立，又稱為弗氏佐劑關節炎。通常用完全弗氏佐劑（CFA）作介導溶劑。
其機制是結核桿菌致關節炎抗原為 65 kD 熱休克蛋白(HSP)，RA病人軟骨內具有與 65kD HSP 相似的蛋白多糖橋聯蛋白抗原成分，CFA 注入激活T細胞，激活T細胞參與 RA 發病機制。
（二）膠原誘導型（collagen-induced arthritis，CIA）（推薦閱讀：膠原誘導關節炎（CIA）嚙齒動物模型）
CIA 模型是由Trentham等于1977年首次建立的實驗性關節炎動物模型。
Ⅱ型膠原蛋白與完全弗氏佐劑（CFA）混合至完全乳化，制備Ⅱ型膠原乳劑對動物進行免疫。
其建模機制是 50％的RA患者血清中存在有抗CⅡ的自身抗體，表明CⅡ可誘導體內產生關節炎性質的自身免疫反應。
（三）膠原抗體誘導型(CAIA)
抗Ⅱ型膠原單克隆抗體源自8周大的雄性DBA/1J 小鼠CIA 模型，這些抗體混合物注射到模型小鼠的關節腔后可直接作用于Ⅱ型膠原或其他在體內高表達的自身抗原，從而發揮免疫介導作用。
該模型的臨床癥狀與CIA和RA很相似，突出特點是能在幾天之內迅速發病，關節組織中巨噬細胞和多核型白細胞浸潤。該模型很好的體現了外源性抗原抗體刺激體誘導的嚴重關節損傷。
Ⅱ型膠原乳劑制備
用高速勻漿機機器攪拌按照佐劑和膠原溶液（1：1），加入順序是把水溶液加到油溶液中去，攪拌中逐滴加入。
模型構建成功展示
總結
為減少震蕩過程中發熱導致的膠原變性，可在管子外面再套一個裝有有冰水混合物的管子。攪拌時間為2min左右。
膠原佐劑劑配成乳劑后一定要檢測乳劑的質量，乳化后的膠原滴入水中不擴散才能進行免疫，如果滴入水中擴散說明乳化效果不好，影響造模效果。乳劑現配現用，乳劑保存時間不超過1小時。
足墊免疫
針頭應插入足墊皮下指向腳踝方向：這樣能夠保證佐劑引流到淋巴結。30min內會看到嚴重的急性炎癥反應，高峰期3-4天，通常情況下回持續20-25天。
免疫的后爪不能作為評分標準，因為即使其四肢都沒有腫脹，免疫的后爪也會發生腫脹。
免疫后12-14天在未注射的爪子發生腫脹，高峰期2-3天，關節炎會持續20-25天。但是有一些大鼠會反生由骨膜反應引起的慢性骨性肥大。
尾根部免疫
2mg/ml的雞II型膠原與含5mg/ml滅活結核桿菌完全弗式佐劑1:1乳化后，200ul尾根部皮內注射，21天后改用2mg/ml的雞II型膠原與不完全弗式佐劑1:1乳化后尾根部皮內第二次注射100ul
模型構建成功展示
為進一步研究類風濕關節炎，建立可靠的模型是研究的關鍵，現在的RA模型
并不能全面的反應人類的臨床癥狀，存在一定的差異性，現存的模型中膠原
誘導性模型和佐劑性模型相對可靠一些，有待于進一步的探討。
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