吉妮歐類風濕性關節炎動物模型背景的建立模型詳細介紹
發布時間：
2022-03-07
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類風濕性關節炎動物模型的建立
類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以關節滑膜炎、破壞性關節病變為主要特征的慢性、自身免疫性疾病，致畸、致殘率極高。（推薦閱讀：類風濕性關節炎(RA)模型、MH7A類風濕關節炎滑膜成纖維細胞、HFLS-RA人類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞）
其臨床癥狀主要表現為全身關節腫脹、疼痛和運動失調等、病情及其嚴重的甚至可能導致殘疾。
其基本病理改變是滑膜炎，急性期滑膜腫脹、滲出，中性粒細胞浸潤；慢性期滑膜增生肥厚，形成血管翳；后者是造成關節破壞、關節畸形、功能障礙、使疾病進入不可逆階段的病理基礎。
發病機制
RA 是一種復雜的免疫性疾病，致病機理目前還沒有完全了解。
目前多認為本病屬于一種自身免疫性疾病，其始動因子尚不清楚，可能是感染因子（如病毒、支原體或細菌等）進入人體后，其所含某些成分（如寡糖或糖肽碎片）被關節內滑膜細胞攝取并組合到滑膜細胞所合成的蛋白多糖中，使其結構發生改變而具抗原性。
此外還和遺傳因素有關，已發現 RA 的易感基因。
目的
為探明類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis，RA）的病因、病理學、免疫學、臨床等方面的機制，尋找更有效的治療 RA 的方案。
因此探尋一種與人類 RA 相似、容易建立、比較經濟的并且能全面反映 RA 特點的動物模型是一種必要的手段
?。ㄒ唬┳魟┱T導型（Adjuvant Arthritis, AA）（推薦閱讀：佐劑性誘導節炎（AIA）嚙齒動物模型）
AA 最早由細菌學家Freund 于20 世紀50 年代創立，又稱為弗氏佐劑關節炎。通常用完全弗氏佐劑（CFA）作介導溶劑。
其機制是結核桿菌致關節炎抗原為 65 kD 熱休克蛋白(HSP)，RA病人軟骨內具有與 65kD HSP 相似的蛋白多糖橋聯蛋白抗原成分，CFA 注入激活T細胞，激活T細胞參與 RA 發病機制。
?。ǘ┠z原誘導型（collagen-induced arthritis，CIA）（推薦閱讀：膠原誘導關節炎（CIA）嚙齒動物模型）
CIA 模型是由Trentham等于1977年首次建立的實驗性關節炎動物模型。
Ⅱ型膠原蛋白與完全弗氏佐劑（CFA）混合至完全乳化，制備Ⅱ型膠原乳劑對動物進行免疫。
其建模機制是 50％的RA患者血清中存在有抗CⅡ的自身抗體，表明CⅡ可誘導體內產生關節炎性質的自身免疫反應。
?。ㄈ┠z原抗體誘導型(CAIA)
抗Ⅱ型膠原單克隆抗體源自8周大的雄性DBA/1J 小鼠CIA 模型，這些抗體混合物注射到模型小鼠的關節腔后可直接作用于Ⅱ型膠原或其他在體內高表達的自身抗原，從而發揮免疫介導作用。
該模型的臨床癥狀與CIA和RA很相似，突出特點是能在幾天之內迅速發病，關節組織中巨噬細胞和多核型白細胞浸潤。該模型很好的體現了外源性抗原抗體刺激體誘導的嚴重關節損傷。
Ⅱ型膠原乳劑制備
用高速勻漿機機器攪拌按照佐劑和膠原溶液（1：1），加入順序是把水溶液加到油溶液中去，攪拌中逐滴加入。
模型構建成功展示
總結
為減少震蕩過程中發熱導致的膠原變性，可在管子外面再套一個裝有有冰水混合物的管子。攪拌時間為2min左右。
膠原佐劑劑配成乳劑后一定要檢測乳劑的質量，乳化后的膠原滴入水中不擴散才能進行免疫，如果滴入水中擴散說明乳化效果不好，影響造模效果。乳劑現配現用，乳劑保存時間不超過1小時。
足墊免疫
針頭應插入足墊皮下指向腳踝方向：這樣能夠保證佐劑引流到淋巴結。30min內會看到嚴重的急性炎癥反應，高峰期3-4天，通常情況下回持續20-25天。
免疫的后爪不能作為評分標準，因為即使其四肢都沒有腫脹，免疫的后爪也會發生腫脹。
免疫后12-14天在未注射的爪子發生腫脹，高峰期2-3天，關節炎會持續20-25天。但是有一些大鼠會反生由骨膜反應引起的慢性骨性肥大。
尾根部免疫
2mg/ml的雞II型膠原與含5mg/ml滅活結核桿菌完全弗式佐劑1:1乳化后，200ul尾根部皮內注射，21天后改用2mg/ml的雞II型膠原與不完全弗式佐劑1:1乳化后尾根部皮內第二次注射100ul
模型構建成功展示
為進一步研究類風濕關節炎，建立可靠的模型是研究的關鍵，現在的RA模型
并不能全面的反應人類的臨床癥狀，存在一定的差異性，現存的模型中膠原
誘導性模型和佐劑性模型相對可靠一些，有待于進一步的探討。
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