AAV8介導的HBV感染大鼠模型建立研究 有助于了解HBV感染的病理生理學、病毒復制
發布時間：
2022-03-31
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背景目的:
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是影響人類健康的重要問題，據WHO報道，全球約20億人曾感染HBV，其中2.4億人為慢性HBV感染者。我國作為乙肝的高流行區，2006年全國乙型肝炎流行病學調查顯示我國一般人群HBsAg攜帶率為7.180l0，乙肝病毒攜帶者約有9000萬人。慢性HBV感染可伴有肝纖維化發生，進而可發展為肝硬化、肝癌。目前尚沒有特異的藥物可以根治乙肝，動物模型對于了解HBV感染的病理生理學、病毒復制的相關機制以及該過程中發生的肝細胞損傷、肝纖維化，藥物療效評價等有重要意義。
肝纖維化的動物模型主要有化學法、膽總管結扎、免疫法、尾靜脈注射轉基因質粒等，但這些模型無法模擬HBV感染的自然史。HBV具有嚴格的宿主特異性，故目前尚缺乏合適的HBV動物模型。AAV 8作為一種嗜肝性病毒，其本身不具有致病性，可作為病毒載體攜帶HBV進入大鼠肝臟，本研究通過對大鼠注射rAAV8-1.3HBV，觀察HBV在大鼠體內的復制以及引起的肝臟病變，旨在探索建立一種新型HBV感染動物模型，為進一步研完HBV復制、致病機制、肝纖維化進展等提供可育色。
方法:
本研完分別對0日齡乳鼠于0, 2, 4周腹腔注射rAAV8-1.3HBV以及對6周齡成年大鼠尾靜脈注射rAAV8-1.3HBV建模。注射rAAV8-1.3HBV后于多個時間節點進行尾靜脈采血100}200u1，分離血清，檢測大鼠血清中HBsAg, HBeAg,ALT及HBVDNAa 12周末處死大鼠，取肝臟。做病理切片，行HE染色及Masson染色，免疫組化檢測HBsAg, HBcAg, TGF-p1, a-SMA表達情況，評估肝臟損傷及纖維化情況。
結果:
乳鼠腹腔注射rAAV8-1.3HBV2周后血中HBsAg和HBeAg均為強陽性，感染率100%，除1只大鼠偏低外，HBsAg平均2686.31士 804.39 IU/ml, HBeAg平均63.60士31.60 NCU/ml, 4周時HBsAg和HBeAg較前呈下降趨勢，8周和12周時仍有部分大鼠HBsAg和HBeAg保持陽性。對照組HBsAg, HBeAg12周內均為陰性。4周時實驗組血中HBVDNA為1.39X 105}1.06X 10' IU/ml，隨時間延長，至12周時血中仍可檢測到較高拷貝的HBVDNA，表現為4.79X 1乎一3.31 X 1護IU/ml o肝臟中HBVDNA高于血清中HBVDNA。成年大鼠尾靜脈注射rAAV8-1.3HBV后3天血中即可檢測出HBsAg陽性，1周時HBsAg較前明顯上升，2周后開始下降，至12周基本變為陰性。HBeAg結果與HBsAg表現不同，在注射后3天，rAAV8-1.3HBV組大鼠血中均未檢%u}J }}l HBeAg，第2周時，HBeAg均為陽性，并保持穩定至12周。
對照組HBsAg, HBeAg12周內均為陰性。注射rAAV8-1.3HBV 8h后，血中可檢測到極高拷貝數的HBVDNA，數值在3.47X 10}0}4.SX 10'0 IU/ml之間，24h時血中HBVDNA仍維持在10' 0數量級，從3天開始血中HBVDNA較前下降，但此時血中HBVDNA仍可保持很高的拷貝數，4周時血中HBVDNA為2.20X 103}1.12X 105 IU/ml，之后維持穩定至12周時。病理可見肝臟充血，部分肝細胞水腫，體積變大，排列紊亂，肝竇受壓變窄，可見嗜酸性變及散在點狀壞死，匯管區略增厚，可見淋巴細胞浸潤。免疫組化可見HBsAg, HBcAg陽性肝細胞，a-SMA, TGF-田明顯陽性，提示肝星狀細胞活化，纖維化發生。
結論:
通過注射rAAV8-1.3HBV, HBV可在大鼠肝臟中持續復制并表達，并可引起肝臟損傷及纖維化的發生，該模型有助于了解HBV感染的病理生理學、病毒復制以及研究該過程中發生的肝細胞損傷、肝纖維化的相關機制。
關健詞:動物模型，大鼠，乙肝
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