AAV8介導(dǎo)的HBV感染大鼠模型建立研究有助于了解HBV感染的病理生理學(xué)、病毒復(fù)制

發(fā)布時(shí)間：

2022-03-31

來源：

專業(yè)提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB細(xì)胞庫源細(xì)胞、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、CRO服務(wù)、SCI潤色)

作者：

吉妮歐

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通過注射rAAV8-1.3HBV, HBV可在大鼠肝臟中持續(xù)復(fù)制并表達(dá)，并可引起肝臟損傷及纖維化的發(fā)生，該模型有助于了解HBV感染的病理生理學(xué)、病毒復(fù)制以及研究該過程中發(fā)生的肝細(xì)胞損傷、肝纖維化的相關(guān)機(jī)制

　　背景目的:
　　乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染是影響人類健康的重要問題，據(jù)WHO報(bào)道，全球約20億人曾感染HBV，其中2.4億人為慢性HBV感染者。我國作為乙肝的高流行區(qū)，2006年全國乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查顯示我國一般人群HBsAg攜帶率為7.180l0，乙肝病毒攜帶者約有9000萬人。慢性HBV感染可伴有肝纖維化發(fā)生，進(jìn)而可發(fā)展為肝硬化、肝癌。目前尚沒有特異的藥物可以根治乙肝，動(dòng)物模型對于了解HBV感染的病理生理學(xué)、病毒復(fù)制的相關(guān)機(jī)制以及該過程中發(fā)生的肝細(xì)胞損傷、肝纖維化，藥物療效評價(jià)等有重要意義。
　　肝纖維化的動(dòng)物模型主要有化學(xué)法、膽總管結(jié)扎、免疫法、尾靜脈注射轉(zhuǎn)基因質(zhì)粒等，但這些模型無法模擬HBV感染的自然史。HBV具有嚴(yán)格的宿主特異性，故目前尚缺乏合適的HBV動(dòng)物模型。AAV 8作為一種嗜肝性病毒，其本身不具有致病性，可作為病毒載體攜帶HBV進(jìn)入大鼠肝臟，本研究通過對大鼠注射rAAV8-1.3HBV，觀察HBV在大鼠體內(nèi)的復(fù)制以及引起的肝臟病變，旨在探索建立一種新型HBV感染動(dòng)物模型，為進(jìn)一步研完HBV復(fù)制、致病機(jī)制、肝纖維化進(jìn)展等提供可育色。
　　方法:
　　本研完分別對0日齡乳鼠于0, 2, 4周腹腔注射rAAV8-1.3HBV以及對6周齡成年大鼠尾靜脈注射rAAV8-1.3HBV建模。注射rAAV8-1.3HBV后于多個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)進(jìn)行尾靜脈采血100}200u1，分離血清，檢測大鼠血清中HBsAg, HBeAg,ALT及HBVDNAa 12周末處死大鼠，取肝臟。做病理切片，行HE染色及Masson染色，免疫組化檢測HBsAg, HBcAg, TGF-p1, a-SMA表達(dá)情況，評估肝臟損傷及纖維化情況。
　　結(jié)果:
　　乳鼠腹腔注射rAAV8-1.3HBV2周后血中HBsAg和HBeAg均為強(qiáng)陽性，感染率100%，除1只大鼠偏低外，HBsAg平均2686.31士 804.39 IU/ml, HBeAg平均63.60士31.60 NCU/ml, 4周時(shí)HBsAg和HBeAg較前呈下降趨勢，8周和12周時(shí)仍有部分大鼠HBsAg和HBeAg保持陽性。對照組HBsAg, HBeAg12周內(nèi)均為陰性。4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組血中HBVDNA為1.39X 105}1.06X 10' IU/ml，隨時(shí)間延長，至12周時(shí)血中仍可檢測到較高拷貝的HBVDNA，表現(xiàn)為4.79X 1乎一3.31 X 1護(hù)IU/ml o肝臟中HBVDNA高于血清中HBVDNA。成年大鼠尾靜脈注射rAAV8-1.3HBV后3天血中即可檢測出HBsAg陽性，1周時(shí)HBsAg較前明顯上升，2周后開始下降，至12周基本變?yōu)殛幮浴BeAg結(jié)果與HBsAg表現(xiàn)不同，在注射后3天，rAAV8-1.3HBV組大鼠血中均未檢%u}J }}l HBeAg，第2周時(shí)，HBeAg均為陽性，并保持穩(wěn)定至12周。
　　對照組HBsAg, HBeAg12周內(nèi)均為陰性。注射rAAV8-1.3HBV 8h后，血中可檢測到極高拷貝數(shù)的HBVDNA，數(shù)值在3.47X 10}0}4.SX 10'0 IU/ml之間，24h時(shí)血中HBVDNA仍維持在10' 0數(shù)量級，從3天開始血中HBVDNA較前下降，但此時(shí)血中HBVDNA仍可保持很高的拷貝數(shù)，4周時(shí)血中HBVDNA為2.20X 103}1.12X 105 IU/ml，之后維持穩(wěn)定至12周時(shí)。病理可見肝臟充血，部分肝細(xì)胞水腫，體積變大，排列紊亂，肝竇受壓變窄，可見嗜酸性變及散在點(diǎn)狀壞死，匯管區(qū)略增厚，可見淋巴細(xì)胞浸潤。免疫組化可見HBsAg, HBcAg陽性肝細(xì)胞，a-SMA, TGF-田明顯陽性，提示肝星狀細(xì)胞活化，纖維化發(fā)生。
　　結(jié)論:
　　通過注射rAAV8-1.3HBV, HBV可在大鼠肝臟中持續(xù)復(fù)制并表達(dá)，并可引起肝臟損傷及纖維化的發(fā)生，該模型有助于了解HBV感染的病理生理學(xué)、病毒復(fù)制以及研究該過程中發(fā)生的肝細(xì)胞損傷、肝纖維化的相關(guān)機(jī)制。
　　關(guān)健詞:動(dòng)物模型，大鼠，乙肝