吉妮歐提供ELISPOT分析檢測(cè)服務(wù)助力疫苗研發(fā)

發(fā)布時(shí)間：

2024-12-23

來(lái)源：

吉妮歐

作者：

小吉

閱讀數(shù)：

2635

ELIspot（酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)）是一種基于單細(xì)胞功能分析的生物檢測(cè)技術(shù)，通過將活細(xì)胞接種于抗體包被的PVDF膜表面，利用固相抗體捕獲分泌性細(xì)胞因子，經(jīng)酶標(biāo)二抗與顯色底物反應(yīng)后，在分泌位點(diǎn)形成可視化斑點(diǎn)。該技術(shù)兼具ELISA的高靈敏度與細(xì)胞培養(yǎng)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)優(yōu)勢(shì)，可在單細(xì)胞分辨率水平定量分析淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ、IL-4等特異性細(xì)胞因子的功能活性，廣泛應(yīng)用于疫苗效力評(píng)估、腫瘤免疫監(jiān)測(cè)及自身免疫疾病研究領(lǐng)域。

ELIspot（酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)）是一種結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）的實(shí)驗(yàn)方法，用于檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。該技術(shù)使用涂有特定抗體的膜來(lái)捕獲細(xì)胞因子，通過酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方式展示結(jié)果。

ELISpot 實(shí)驗(yàn)原理圖來(lái)源于Janetzki S, Price L, Schroeder H, Britten CM, Welters MJ, Hoos A. Guidelines for the automated evaluation of Elispot assays. Nat Protoc. 2015 Jul;10(7):1098-115. doi: 10.1038/nprot.2015.068. Epub 2015 Jun 25. PMID: 26110715.

ELIspot 實(shí)驗(yàn)大致流程

1. 膜準(zhǔn)備

使用PVDF膜為底的96孔板，包被特定的單克隆抗體。

2. 細(xì)胞培養(yǎng)

• 向孔內(nèi)添加待檢測(cè)的細(xì)胞和抗原刺激物進(jìn)行培養(yǎng)。
• 在刺激下，細(xì)胞會(huì)分泌相應(yīng)的細(xì)胞因子，這些因子被膜上的抗體所捕獲。

3. 洗滌與檢測(cè)

• 洗去細(xì)胞后，被捕獲的細(xì)胞因子與生物素標(biāo)記的第二抗體結(jié)合。
• 使用酶標(biāo)記的親和素與生物素結(jié)合，進(jìn)行化學(xué)酶聯(lián)顯色，形成圓形斑點(diǎn)。

4. 數(shù)據(jù)分析

統(tǒng)計(jì)膜上斑點(diǎn)的數(shù)量，并將其除以初始細(xì)胞的總數(shù)，以計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分比。

ELISpot實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖與對(duì)應(yīng)統(tǒng)計(jì)表格

ELIspot 技術(shù)特點(diǎn)

高靈敏度：在一百萬(wàn)個(gè)陰性細(xì)胞中，可以檢測(cè)到一個(gè)陽(yáng)性細(xì)胞，靈敏度比傳統(tǒng)ELISA高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)。

單細(xì)胞水平：檢測(cè)活細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，而非細(xì)胞群體的平均分泌，有效評(píng)估活細(xì)胞功能。

操作簡(jiǎn)便與經(jīng)濟(jì)：無(wú)需復(fù)雜的細(xì)胞體外擴(kuò)增過程，無(wú)同位素使用，也不需要大型專用設(shè)備，能夠處理大量樣品，提高檢測(cè)效率。

ELIspot技術(shù)廣泛應(yīng)用于：

• 感染性和腫瘤疫苗的臨床藥效學(xué)評(píng)估
• 免疫原性檢測(cè)：影響CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增和存續(xù)的重要因素。
• 藥物篩選：評(píng)估基因治療產(chǎn)品安全性和有效性的重要指標(biāo)。

通過ELIspot技術(shù)，研究人員可以獲得更準(zhǔn)確、有效的細(xì)胞因子分泌信息，為疫苗開發(fā)和免疫療法研究提供了重要工具。

案例展示

乙肝mRNA疫苗動(dòng)物模型-Elispot-T細(xì)胞檢測(cè)

乙肝mRNA疫苗動(dòng)物模型-Elispot-HBsAb

吉妮歐生物擁有豐富的細(xì)胞資源和動(dòng)物模型，可提供多種體外細(xì)胞檢測(cè)服務(wù)，我們?cè)谶@領(lǐng)域積累了豐富經(jīng)驗(yàn)和大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

為助力疫苗研發(fā)，吉妮歐生物可提供ELISpot分析檢測(cè)服務(wù)，根據(jù)客戶的不同需求，設(shè)計(jì)合適的方案，提供有效的方法學(xué)驗(yàn)證，出具個(gè)性化的分析結(jié)果報(bào)告，不僅可以為客戶提供一站式ELISpot分析檢測(cè)服務(wù)，也可為有需求的客戶提供讀板服務(wù)。