HBV siRNA 療法通過 AAV-HBV 小鼠模型證實可有效降低慢乙肝患者的 HBsAg

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2022-02-28

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當前慢性乙型肝炎的標準用藥未能降低實現功能性治愈所需的乙肝表面抗原（ HBsAg）。HBV siRNA 療法已被證明可有效降低慢乙肝患者的 HBsAg。幾十年來，2'F 和 2'OMe 修飾核苷酸是用于穩定 siRNA 雙鏈體和保持 RNA 樣特性的基礎

　　當前慢性乙型肝炎的標準用藥未能降低實現功能性治愈所需的乙肝表面抗原（ HBsAg）。HBV siRNA 療法已被證明可有效降低慢乙肝患者的 HBsAg。幾十年來，2'F 和 2'OMe 修飾核苷酸是用于穩定 siRNA 雙鏈體和保持 RNA 樣特性的基礎。
　　美國肝病學會年會上的這項研究中，研究人員應用了多種不同的新型穩定化學方法，包括獨特的 5' 磷酸鹽模擬物和新型核苷酸來修飾HBV siRNA。測試結果顯示此方法產生的HBV siRNA 在 AAV-HBV 小鼠模型血清中 HBsAg 敲低的程度和持續時間方面取得了顯著改善。
　　研究在溶酶體和蛇毒磷酸二酯酶 (SVP) 測定中進行了HBV siRNA 穩定性分析。抑制 HBsAg 釋放能力是通過使用 RNAiMAX 轉染在 HepG2 .2 .15 細胞系中進行測定的。分泌的HBsAg使用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)進行定量檢測。

　　在 AAV-HBV 小鼠模型中，每 5 天收集 GalNAc 綴合 HBV siRNA 皮下 (SC) 給藥后的血液用于 HBsAg 和 ALT 評估。研究結束時用Stem-Loop qPCR法檢測小鼠肝臟中RISC裝載siRNA 含量，Northern blot 法檢測 HBV RNA 降解，ELISA法檢測 HBsAg 含量。
　　研究結果，ALG-125918 是在 ALG-125819 基礎上添加新的5‘-磷酸模擬物而演進成的 HBV siRNA。
　　當在 AAV-HBV 小鼠模型中以 5 mg/kg 的單劑量給藥時，ALG-125918 可敲低 AAV-HBV 小鼠血清中最高達 1.5 log10 IU/mL 的HBsAg ，比ALG-125819 還高 0.5 log10 IU/mL。
　　在 AAV-HBV 小鼠中單次給藥后，ALG-125918 敲低 HBsAg 的持久性維持了 90 天，而其親本則為 30 天。與ALG-125819處理的小鼠相比，ALG-125918 效力和持久性的改善與用藥后小鼠肝臟中RISC相關siRNA水平的提高有關。
　　這項研究生成的另一種 siRNA 是ALG-125986，這是一種未結合的 HBV siRNA，在反義鏈的關鍵位置摻入了一種新型堿基修飾核苷酸。與親本相比，這種單一摻入在 24 小時測定中將在蛇毒磷酸二酯酶 (SVP) 中的穩定性提高了 50%，但在 HepG2 .2 .15 測定中效力僅有中度提高。
　　然而，在 5 mg/kg 單劑量的 AAV-HBV 小鼠模型測試中，ALG-125986 的 GalNAc 綴合物顯示出超過其親本 siRNA 0.4 log10 IU/mL 的 HBsAg 敲低。
　　綜上，研究發現多種新型 siRNA 化學物質在體外和體內表現出增強的效力和耐久性，這將使研究人員有機會開發出一流的 HBV siRNA。