HBV siRNA 療法通過(guò) AAV-HBV 小鼠模型證實(shí)可有效降低慢乙肝患者的 HBsAg

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2022-02-28

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當(dāng)前慢性乙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)用藥未能降低實(shí)現(xiàn)功能性治愈所需的乙肝表面抗原（ HBsAg）。HBV siRNA 療法已被證明可有效降低慢乙肝患者的 HBsAg。幾十年來(lái)，2'F 和 2'OMe 修飾核苷酸是用于穩(wěn)定 siRNA 雙鏈體和保持 RNA 樣特性的基礎(chǔ)

　　當(dāng)前慢性乙型肝炎的標(biāo)準(zhǔn)用藥未能降低實(shí)現(xiàn)功能性治愈所需的乙肝表面抗原（ HBsAg）。HBV siRNA 療法已被證明可有效降低慢乙肝患者的 HBsAg。幾十年來(lái)，2'F 和 2'OMe 修飾核苷酸是用于穩(wěn)定 siRNA 雙鏈體和保持 RNA 樣特性的基礎(chǔ)。
　　美國(guó)肝病學(xué)會(huì)年會(huì)上的這項(xiàng)研究中，研究人員應(yīng)用了多種不同的新型穩(wěn)定化學(xué)方法，包括獨(dú)特的 5' 磷酸鹽模擬物和新型核苷酸來(lái)修飾HBV siRNA。測(cè)試結(jié)果顯示此方法產(chǎn)生的HBV siRNA 在 AAV-HBV 小鼠模型血清中 HBsAg 敲低的程度和持續(xù)時(shí)間方面取得了顯著改善。
　　研究在溶酶體和蛇毒磷酸二酯酶 (SVP) 測(cè)定中進(jìn)行了HBV siRNA 穩(wěn)定性分析。抑制 HBsAg 釋放能力是通過(guò)使用 RNAiMAX 轉(zhuǎn)染在 HepG2 .2 .15 細(xì)胞系中進(jìn)行測(cè)定的。分泌的HBsAg使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行定量檢測(cè)。

　　在 AAV-HBV 小鼠模型中，每 5 天收集 GalNAc 綴合 HBV siRNA 皮下 (SC) 給藥后的血液用于 HBsAg 和 ALT 評(píng)估。研究結(jié)束時(shí)用Stem-Loop qPCR法檢測(cè)小鼠肝臟中RISC裝載siRNA 含量，Northern blot 法檢測(cè) HBV RNA 降解，ELISA法檢測(cè) HBsAg 含量。
　　研究結(jié)果，ALG-125918 是在 ALG-125819 基礎(chǔ)上添加新的5‘-磷酸模擬物而演進(jìn)成的 HBV siRNA。
　　當(dāng)在 AAV-HBV 小鼠模型中以 5 mg/kg 的單劑量給藥時(shí)，ALG-125918 可敲低 AAV-HBV 小鼠血清中最高達(dá) 1.5 log10 IU/mL 的HBsAg ，比ALG-125819 還高 0.5 log10 IU/mL。
　　在 AAV-HBV 小鼠中單次給藥后，ALG-125918 敲低 HBsAg 的持久性維持了 90 天，而其親本則為 30 天。與ALG-125819處理的小鼠相比，ALG-125918 效力和持久性的改善與用藥后小鼠肝臟中RISC相關(guān)siRNA水平的提高有關(guān)。
　　這項(xiàng)研究生成的另一種 siRNA 是ALG-125986，這是一種未結(jié)合的 HBV siRNA，在反義鏈的關(guān)鍵位置摻入了一種新型堿基修飾核苷酸。與親本相比，這種單一摻入在 24 小時(shí)測(cè)定中將在蛇毒磷酸二酯酶 (SVP) 中的穩(wěn)定性提高了 50%，但在 HepG2 .2 .15 測(cè)定中效力僅有中度提高。
　　然而，在 5 mg/kg 單劑量的 AAV-HBV 小鼠模型測(cè)試中，ALG-125986 的 GalNAc 綴合物顯示出超過(guò)其親本 siRNA 0.4 log10 IU/mL 的 HBsAg 敲低。
　　綜上，研究發(fā)現(xiàn)多種新型 siRNA 化學(xué)物質(zhì)在體外和體內(nèi)表現(xiàn)出增強(qiáng)的效力和耐久性，這將使研究人員有機(jī)會(huì)開(kāi)發(fā)出一流的 HBV siRNA。