國內流行B、C基因型序列成功建立兩株AAV-HBV小鼠模型為研究B、C 基因利病毒提供新工具
發布時間：
2022-04-07
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乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是主要全球公共衛生問題之一。我國有約8700萬感染者，HBV感染是導致我國肝病高發的主要原因之一。雖然已鑒定出NTCP是HBV建立細胞感染主要受體之一，但含有人NTCP基因工程小鼠仍不能支持HBV在體內復制。因此，目前HBV研究領域仍需在小鼠中模擬HBV感染，如水動力高壓注射法、重組腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）介導法、人源化人-鼠嵌合肝等。質粒水動力高壓注射HBV質粒方式建立的HBV小鼠模型中，HBV病毒持續周期短，更類似一種急性感染，同時，該操作技術要求高，成模率低。AAV介導法建立的AAV-HBV小鼠模型成模率較高，HBV更易建立慢性長期持續感染，近年來在HBV領域中廣泛使用。
HBV感染引起的肝臟相關疾病的臨床表現和治療預后與HBV基因型密切相關。HBV分為A~J共10個基因型16，中國以B和C基因型為主【7。我國HBV感染誘發的肝炎與繼發肝癌高發可能與所感染B、C基因型病毒有關，其中C基因型HBV感染更可能導致嚴重肝病、肝硬化、肝癌的發生。在此之前國內HBV病毒學相關研究中一直使用D基因型病毒株。但D基因型主要分布在印度、南歐和北非地區，我國很少有D基因型報道。本研究建立了中國流行B、C基因型病毒株，并全面分析了AAV-HBV小鼠血清內的HBV病毒標志物變化特征。
目的
建立乙型肝炎病毒（HBV）B、C基因型中國流行株腺相關病毒介導的乙肝病毒AAV-HBV小鼠模型，并研究其病毒學變化特征。
方法
以B、C基因型HBV流行株序列為基礎，并參照常用D基因型病毒序列，分別構建出攜帶1.3×基因組的腺相關病毒載體質粒∶pAAV-HBV1.3×（B）、pAAV-HBV1.3×（C）和pAAV-HBV1.3x（D）。通過三質粒共轉染方法在 293細胞中包裝成三種成熟的腺相關病毒載體rAAV-HBV1.3（B）、rAAV-HBV 1.3（C）與rAAV-HBV1.3（D）。C57BLJ小鼠通過尾靜脈注射相同劑量的AAV-HBV病毒載體，在注射后不同時間點.用ELISA方法檢測血清中HBsAg和HBeAg表達水平，用熒光定量PCR（O-PCR）方法檢測小鼠血清中HBV DNA拷貝數。
結果
新構建 B、C基因型兩株病毒有更高HBsAg表達水平，B基因型小鼠血清中HBsAg檢測值（均值）波動在957.67~2 590.04 IU/mL，C基因型小鼠血清HBsAg波動在725.21~3 195.16 U/mL，D基因型小鼠血清HBsAg波動在153.4~531.8IJ/mL。B基因型小鼠血清中.HBsAg與HBVDNA 比值最高.D基因型最低。新構建B、C基因型
兩株病毒表現出與常用D基因型病毒不同的血清動力學特征。B、C基因型小鼠的HBsAg和HBV DNA可在1周內快速達到較高水平，并維持穩定，在第3~4周表現出波動下降，隨后表達水平回升。D基因型小鼠HBsAg在10 d內達到峰值，然后不斷降低，HBV DNA在第3~4周也有明顯波動。B、C、D三種基因型HBeAg在第1周較低，在兩周達到峰值，并保持穩定。
結論
基于我國流行B、C基因型序列，成功建立了兩株AAV-HBV小鼠模型，為研究B、C 基因利病毒提供了新工具。
關鍵詞∶乙型肝炎病毒;AAV-HBV;B、C基因型
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