蒼術酮對肝癌荷瘤小鼠腫瘤體積和質量的影響

發布時間：

2022-06-13

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研究蒼術酮對肝癌荷瘤小鼠腫瘤生長、上皮-間充質轉化（epithelial mesenchymal transition，EMT）和凋亡標志物表達的影響

　　摘要：
　　原發性肝癌是高病死率的惡性腫瘤之一，給世界各國人民的健康帶來極大危害。我國是原發性肝癌的重災區，患者數量和病死率均占世界前列。
　　目前肝癌治療尚無特效藥，基本采用綜合治療方案，早期以手術治療為主，對無法手術或者不能耐受手術的，采用TACE、姑息治療和綜合對癥處理，以此控制腫瘤生長和轉移，延長患者生存期。肝癌是一種具有高轉移潛能的惡性腫瘤，其復發和轉移是大多數肝癌患者治療失敗和死亡的主要原因。上皮-間充質轉化（epithelial mesenchymal transition，EMT）被認為是腫瘤細胞擴散的初始步驟，可導致惡性腫瘤的侵襲和轉移，因此抑制腫瘤細胞EMT的發生對腫瘤的治療具有積極意義。（推薦閱讀：FAO大鼠肝癌細胞、Li-7人肝癌細胞、肝癌原位模型）
　　在肝癌的預防治療中，從中醫藥寶庫中發掘有效的輔助治療方法，無疑是其發展方向之一。蒼術為菊科草本植物茅蒼術Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北蒼術Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥塊莖，味辛、苦，性溫，具有燥濕健脾、祛風散寒的功效，是臨床許多中藥方劑的重要組成部分。蒼術酮是從蒼術中分離得到的倍半萜類有效成分，現代藥理研究表明，蒼術酮具有保肝、抗病毒和抗腫瘤等多種藥理活性。本課題組前期研究發現蒼術酮可抑制肝癌HepG2細胞的增殖和遷移，誘導腫瘤細胞的凋亡。
　　本研究擬在既往研究基礎上，通過在非肥胖糖尿病/重癥聯合免疫缺陷小鼠（non-obese diabetes/server combined immune deficiency，NOD/SCID）小鼠左側背部皮下種植HepG2細胞懸液的方法制備肝癌荷瘤小鼠動物模型，以進一步研究在此動物模型中蒼術酮對腫瘤生長、EMT和凋亡的影響。

　　目的∶
　　研究蒼術酮對肝癌荷瘤小鼠腫瘤生長、上皮-間充質轉化（epithelial mesenchymal transition，EMT）和凋亡標志物表達的影響。
　　方法∶
　　在非肥胖糖尿病/重癥聯合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠左側背部，皮下種植100 μL的HepG2細胞懸液（1×10/只）。當注射位置腫瘤生長到50~100 mm?之后，將18只小鼠隨機分成對照組、蒼術酮低劑量組（低劑量組）和蒼術酮高劑量組（高劑量組），每組6只。蒼術酮溶于玉米油中，低、高劑量組分別按照5、10mg/kg劑量灌胃給藥;對照組僅給予玉米油灌胃。每日1 次，共15d。實驗結束后處死小鼠，采集腫瘤瘤體組織待測。部分腫瘤組織置福爾馬林中固定，石蠟包埋切片，進行免疫組化染色，用于檢測Ki-67。部分腫瘤組織進行裂解抽提總蛋白，采用BCA法測定蛋白濃度，10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，半干法轉移至硝酸纖維素膜，Westerm Blot法檢測EMT標志物（E鈣黏蛋白、N鈣黏蛋白、波形蛋白和α-SMA）、EMT促進因子（MMP-2、MMP-9和TIMP-2）和凋亡相關因子（Bcl-2、Bax和裂解Caspase-3）的蛋白表達水平。結果∶蒼術酮治療后荷瘤小鼠皮下腫瘤的體積和質量均明顯下降，其作用呈現劑量依賴性。蒼術酮組Ki-67陽性染色面積均顯著縮小.尤其以高劑量組最為明顯。
　　檢測結果顯示，蒼術酮干預顯著上調了上皮標記物（E鈣黏蛋白）的表達，下調了間充質標記物（N-鈣黏蛋白、波形蛋白和α-SMA）的表達;顯著增加了TIMP-2的表達，降低了MMP-2和MMP-9的表達;降低了Bcl-2的表達水平，顯著增加了Bax和裂解Capase-3的表達水平。
　　結論
　　蒼術酮具有一定的體內抗腫瘤效應，可抑制EMT和降低MMP減少肝癌細胞遷移和侵襲，通過凋亡途徑促進肝癌細胞的凋亡。
　　關鍵詞
　　蒼術酮;肝癌;荷瘤小鼠;上皮-間充質轉化;細胞凋亡