通過(guò)慢病毒介導(dǎo)構(gòu)建腫瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549細(xì)胞模型，檢測(cè)p53沉默后對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞自噬反應(yīng)的影響

發(fā)布時(shí)間：

2022-07-07

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檢測(cè)p53沉默人肺腺癌A549細(xì)胞模型構(gòu)建成功；Western blotting結(jié)果顯示，p53沉默下調(diào) p62和上調(diào) LC3，促進(jìn)細(xì)胞自噬。結(jié)論 ?成功構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的腫瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549細(xì)胞模型，該細(xì)胞模型能夠促進(jìn)自噬的發(fā)生發(fā)展，可能為臨床治療肺癌疾病提供一種新的思路

　　摘要
　　近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中，p53作為一個(gè)腫瘤抑制基因，對(duì)于維護(hù)基因組和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)起著重要的作用。自噬作為一種細(xì)胞自我保護(hù)機(jī)制，能夠在營(yíng)養(yǎng)缺陷狀態(tài)下，維持細(xì)胞的存活。自噬性細(xì)胞死亡與腫瘤發(fā)生發(fā)展也有著重要的聯(lián)系團(tuán)。研究發(fā)現(xiàn)，定位于細(xì)胞質(zhì)的 p53通過(guò)轉(zhuǎn)錄非依賴方式抑制自噬，而定位于細(xì)胞核的 p53通過(guò)反式激活靶基因增強(qiáng)自噬。因此p53對(duì)自噬是一把雙刃劍。但是迄今為止，還未明確 p53在人肺腺癌 A549 細(xì)胞中與自噬的關(guān)系，本研究通過(guò)慢病毒技術(shù)構(gòu)建 p53沉默的人肺腺癌 A549細(xì)胞模型并且初步探索其與自噬的關(guān)系，從而為臨床治療肺癌提供新的思路。
　　目的
　　通過(guò)慢病毒介導(dǎo)構(gòu)建腫瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549細(xì)胞模型，檢測(cè)p53沉默后對(duì)人肺腺癌A549細(xì)胞自噬反應(yīng)的影響。
　　方法
　　利用 pCDH-MSCV-MCS-EF1-Pund 慢病毒載體構(gòu)建重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒和空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 293T細(xì)胞，收集病毒液后，感染 A549細(xì)胞，構(gòu)建沉默細(xì)胞模型。將空載質(zhì)粒組和重組質(zhì)粒組分別設(shè)置為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。利用Western blotting技術(shù)檢測(cè)p53沉默效率和自噬相關(guān)指標(biāo)p62和LC3。

　　結(jié)果
　　檢測(cè)p53沉默人肺腺癌A549細(xì)胞模型構(gòu)建成功；Western blotting結(jié)果顯示，p53沉默下調(diào) p62和上調(diào) LC3，促進(jìn)細(xì)胞自噬。結(jié)論成功構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)的腫瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549細(xì)胞模型，該細(xì)胞模型能夠促進(jìn)自噬的發(fā)生發(fā)展，可能為臨床治療肺癌疾病提供一種新的思路。
　　關(guān)鍵詞
　　人肺腺癌A549細(xì)胞,細(xì)胞模型,p53,肺腺癌, 自噬