通過慢病毒介導構建腫瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549細胞模型，檢測p53沉默后對人肺腺癌A549細胞自噬反應的影響
發布時間：
2022-07-07
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摘要
近年來研究發現，在腫瘤的發生發展中，p53作為一個腫瘤抑制基因，對于維護基因組和細胞穩態起著重要的作用。自噬作為一種細胞自我保護機制，能夠在營養缺陷狀態下，維持細胞的存活。自噬性細胞死亡與腫瘤發生發展也有著重要的聯系團。研究發現，定位于細胞質的 p53通過轉錄非依賴方式抑制自噬，而定位于細胞核的 p53通過反式激活靶基因增強自噬。因此p53對自噬是一把雙刃劍。但是迄今為止，還未明確 p53在人肺腺癌 A549 細胞中與自噬的關系，本研究通過慢病毒技術構建 p53沉默的人肺腺癌 A549細胞模型并且初步探索其與自噬的關系，從而為臨床治療肺癌提供新的思路。
目的
通過慢病毒介導構建腫瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549細胞模型，檢測p53沉默后對人肺腺癌A549細胞自噬反應的影響。
方法
利用 pCDH-MSCV-MCS-EF1-Pund 慢病毒載體構建重組質粒，將重組質粒和空載質粒轉染 293T細胞，收集病毒液后，感染 A549細胞，構建沉默細胞模型。將空載質粒組和重組質粒組分別設置為對照組和實驗組。利用Western blotting技術檢測p53沉默效率和自噬相關指標p62和LC3。
結果
檢測p53沉默人肺腺癌A549細胞模型構建成功；Western blotting結果顯示，p53沉默下調 p62和上調 LC3，促進細胞自噬。結論 成功構建慢病毒介導的腫瘤抑制基因p53沉默人肺腺癌A549細胞模型，該細胞模型能夠促進自噬的發生發展，可能為臨床治療肺癌疾病提供一種新的思路。
關鍵詞
人肺腺癌A549細胞,細胞模型,p53,肺腺癌, 自噬
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