Cas9基因編輯細(xì)胞株構(gòu)建

服務(wù)概述

　　CRISPR/Cas9系統(tǒng)由一個(gè)單鏈向?qū)NA（small guide RNA, sgRNA）和一個(gè)具有核酸內(nèi)切酶功能的Cas9 蛋白組成，其技術(shù)原理包括sgRNA引導(dǎo)的Cas9靶向DNA切割和DNA修復(fù)兩個(gè)基本過程。CRISPR/Cas9技術(shù)的優(yōu)勢是能永久性地改變基因組DNA的序列，并且可以在不編碼的DNA區(qū)域進(jìn)行編輯，可以多個(gè)位置同時(shí)進(jìn)行編輯。
　　通過Cas9基因編輯技術(shù)，對目的基因進(jìn)行敲除構(gòu)建的細(xì)胞株可用于基因功能研究、疾病模型構(gòu)建、基因治療等方面，具有廣闊的應(yīng)用前景。

服務(wù)內(nèi)容

　　構(gòu)建Cas9基因編輯細(xì)胞株。

服務(wù)流程

　　1.sgRNA設(shè)計(jì)與載體構(gòu)建
　　包括靶基因分析、靶點(diǎn)設(shè)計(jì)與載體構(gòu)建；

　　2. sgRNA篩選與CAS9/gRNA及同源重組單鏈donor轉(zhuǎn)染293細(xì)胞

　　3. 單克隆細(xì)胞株篩選
　　觀察轉(zhuǎn)染熒光率，96孔板極限稀釋，24h到48h標(biāo)記單克隆（GFP or RED熒光細(xì)胞），擴(kuò)培后進(jìn)行下一步檢測；

　　4. PCR檢測及測序驗(yàn)證
　　提取基因DNA，PCR擴(kuò)增敲除靶點(diǎn)附近的基因組序列，并通過測序鑒定陽性敲除克隆。

　　5.目的細(xì)胞擴(kuò)培與保種

　　6.交付實(shí)物
　　目的基因敲除細(xì)胞的單克隆細(xì)胞系：1到2*10^6個(gè)cells。

服務(wù)優(yōu)勢

　　1.一站式服務(wù)
　　提供一站式CRISPR/Cas9基因敲除及點(diǎn)突變細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，省事省心；

　　2.質(zhì)量保障
　　保證細(xì)胞株無支原體衣原體感染；

　　3. 技術(shù)指導(dǎo)
　　提供專業(yè)培養(yǎng)和Cas9技術(shù)指導(dǎo)；

　　4. 售后無憂
　　發(fā)貨細(xì)胞2周無責(zé)售后，無后顧之憂；KO細(xì)胞為客戶長期保存。