學(xué)術(shù)研究院
通路工具細(xì)胞
服務(wù)概述
CRISPR/Cas9系統(tǒng)由一個(gè)單鏈向?qū)NA（small guide RNA, sgRNA）和一個(gè)具有核酸內(nèi)切酶功能的Cas9 蛋白組成，其技術(shù)原理包括sgRNA引導(dǎo)的Cas9靶向DNA切割和DNA修復(fù)兩個(gè)基本過(guò)程。CRISPR/Cas9技術(shù)的優(yōu)勢(shì)是能永久性地改變基因組DNA的序列，并且可以在不編碼的DNA區(qū)域進(jìn)行編輯，可以多個(gè)位置同時(shí)進(jìn)行編輯。
通過(guò)Cas9基因編輯技術(shù)，對(duì)目的基因進(jìn)行敲除構(gòu)建的細(xì)胞株可用于基因功能研究、疾病模型構(gòu)建、基因治療等方面，具有廣闊的應(yīng)用前景。
服務(wù)內(nèi)容
構(gòu)建Cas9基因編輯細(xì)胞株。
服務(wù)流程
- 1、sgRNA設(shè)計(jì)與載體構(gòu)建
包括靶基因分析、靶點(diǎn)設(shè)計(jì)與載體構(gòu)建；
2、sgRNA篩選與CAS9/gRNA及同源重組單鏈donor轉(zhuǎn)染293細(xì)胞
3、單克隆細(xì)胞株篩選
觀察轉(zhuǎn)染熒光率，96孔板極限稀釋?zhuān)?4h到48h標(biāo)記單克隆（GFP or RED熒光細(xì)胞），擴(kuò)培后進(jìn)行下一步檢測(cè)；
4、PCR檢測(cè)及測(cè)序驗(yàn)證
提取基因DNA，PCR擴(kuò)增敲除靶點(diǎn)附近的基因組序列，并通過(guò)測(cè)序鑒定陽(yáng)性敲除克隆。
5、目的細(xì)胞擴(kuò)培與保種
6、交付實(shí)物
目的基因敲除細(xì)胞的單克隆細(xì)胞系：1到2*10^6個(gè)cells。 -
Cas9基因編輯細(xì)胞株流程示意圖
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
- 1、一站式服務(wù)
提供一站式CRISPR/Cas9基因敲除及點(diǎn)突變細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)，省事省心；
2、質(zhì)量保障
保證細(xì)胞株無(wú)支原體衣原體感染；
3、技術(shù)指導(dǎo)
提供專(zhuān)業(yè)培養(yǎng)和Cas9技術(shù)指導(dǎo)；
4、售后無(wú)憂
發(fā)貨細(xì)胞2周無(wú)責(zé)售后，無(wú)后顧之憂；KO細(xì)胞為客戶長(zhǎng)期保存。
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