人類風濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞系原代培養(yǎng)取材注意事項及要求這些你都清楚嗎？

發(fā)布時間：

2021-12-09

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人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進行細胞培養(yǎng)的第一步，若取材不當，將會直接影響細胞的體外培養(yǎng)，現(xiàn)將取材的基本要求和注意事項敘述整理如下，請查收。

　　類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是臨床常見的慢性炎性自身免疫性疾病,以多關(guān)節(jié)炎癥、滑膜增生和骨侵蝕為基本特征。吉妮歐提供 人類風濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細胞系的原代培養(yǎng)技術(shù)及銷售代購相關(guān)服務(wù)，也可幫忙代做細胞建系。如有需要的同學請來電或在線預約！
　　滑膜炎癥伴大量血管翳形成是導致RA骨侵蝕、關(guān)節(jié)破壞的主要原因。疾病過程中,異常的血管新生是滑膜增生和血管翳形成的病理基礎(chǔ)。調(diào)節(jié)血管新生的因子有許多種,其中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是最重要的因子之一;其次,基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)也對血管翳的增生有重要作用。
　　原代細胞的取材
　　人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進行細胞培養(yǎng)的第一步，若取材不當，將會直接影響細胞的體外培養(yǎng)，現(xiàn)將取材的基本要求和注意事項敘述如下：
　　取材的基本要求
　　（1）取材要注意新鮮和保鮮新鮮組織易于培養(yǎng)成功，取材時應(yīng)盡量在4~6h內(nèi)能制作成細胞，盡快入箱培養(yǎng)，若不能即時培養(yǎng)，應(yīng)將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，于4℃存放。若組織塊較大，應(yīng)在清除表面血塊、壞死組織、脂肪和結(jié)締組織后，切碎于培養(yǎng)液內(nèi)4℃存放，但時間不能超過24h。對于已切碎的組織或血液、淋巴組織應(yīng)加入含10%二甲基亞砜的培養(yǎng)基，按細胞凍存方式于液氮中冷凍保存。
　　（2）取材應(yīng)嚴格無菌所取標本材料應(yīng)在無菌條件下進行，為了確保無菌，對所取材料若疑有污染的可能，應(yīng)將所取組織在含高濃度抗菌素（400單位/mL）甚至加入適量的兩性霉素B或10%達克寧液的培養(yǎng)液內(nèi)于4℃下存放2小時以上，再用PBS洗2~3次，以確保所取材料無菌。要用無菌包裝的器皿或事先消毒好的帶少許培養(yǎng)液（內(nèi)含400單位/mL抗菌素）的小瓶等便于攜帶的物品來取材，所取材料應(yīng)避免接觸有毒有害的化學物質(zhì)，如碘、汞等。
　　（3）取材和原代細胞制作時，要用鋒利的器械，如手術(shù)刀或剃須刀片切碎組織，盡可能減少對細胞的機械損傷。
　　（4）要仔細去除所取材料上的血液（血塊）、脂肪、壞死組織及結(jié)締組織，切碎組織時應(yīng)避免組織干燥，可在含少量培養(yǎng)液的器皿中進行。
　　（5）取材應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等，一般來講，胚胎組織較成熟個體組織容易培養(yǎng)，分化低的較分化高的組織容易生長，腫瘤組織較正常組織容易培養(yǎng)。取材時應(yīng)盡量選用易培養(yǎng)的組織進行培養(yǎng)。
　　（6）原代細胞取材時要同時留好組織學標本和電鏡標本。對組織的來源、部位、包括供體的一般情況要做詳細的記錄，以備以后查詢