胃癌三種細(xì)胞株傳代、細(xì)胞并存及細(xì)胞復(fù)蘇知識(shí)步驟分享

發(fā)布時(shí)間：

2022-01-17

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以下是胃癌三種細(xì)胞株MGC-803,BGC-823以及SGC-7901的培養(yǎng)，具體方法步驟如下，A將復(fù)蘇長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,加3ml 0.86%生理鹽水洗滌兩次,棄去洗滌液,加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml,消化液均勻覆蓋細(xì)胞表面,消化時(shí)間約1-3分鐘

　　以下是人胃癌細(xì)胞三種細(xì)胞株MGC-803,BGC-823以及SGC-7901的培養(yǎng)，具體方法步驟如下：
　　1）細(xì)胞傳代：
　　A將復(fù)蘇長(zhǎng)滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,加3ml 0.86%生理鹽水洗滌兩次,棄去洗滌液,加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml,消化液均勻覆蓋細(xì)胞表面,消化時(shí)間約1-3分鐘。
　　B消化后在倒置顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞皺縮變圓,邊緣折光性增強(qiáng),在細(xì)胞尚未脫落時(shí)倒掉消化液,立即加入血清或含血清的培養(yǎng)基,終止消化。
　　C 用吸管將培養(yǎng)瓶壁上的細(xì)胞吹打下來(lái), 1000 rpm/分鐘，離心5分鐘,棄去培養(yǎng)基,加入含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液6ml,吹打混勻, 視細(xì)胞密度以1:2或1:3分瓶培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶且形成致密單層時(shí)即可再傳代。
　　2）細(xì)胞凍存：
　　A取在培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)已經(jīng)生長(zhǎng)2－3天形成單層的細(xì)胞，最好在凍存前一天換液，以保證細(xì)胞處于良好的營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)。
　　B 用胰蛋白酶消化細(xì)胞，計(jì)數(shù)，1000 rpm/分鐘，離心10分鐘。
　　C 棄去上清，用配好的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并配成濃度為106 細(xì)胞/ ml的細(xì)胞懸液。
　　D 用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，按1 ml的量分裝入無(wú)菌凍存管內(nèi)。
　　E 然后將標(biāo)記好的凍存管放入－20℃，2小時(shí)后放入－80℃過(guò)夜，次日放入液氮中。
　　3）細(xì)胞復(fù)蘇：
　　A從液氮罐中取出一凍存管的細(xì)胞,迅速放入37℃水中,使之基本融化,那入超凈臺(tái),吸出細(xì)胞放入5ml含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液的離心管,1000 rpm/分鐘，離心5分鐘。
　　B棄去培養(yǎng)基,加入含10%FBS的RPMI-1640培養(yǎng)液6ml,吹打混勻,分裝成兩瓶,放入在37℃、5% CO2,飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
　　C 24小時(shí)更換培養(yǎng)基一次,待細(xì)胞融合時(shí)用0.25%胰蛋白酶消化傳代,取3-4代的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用
　　以上細(xì)胞都是貼壁細(xì)胞