沉默對脂多糖誘導(dǎo)的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞增殖、凋亡的影響

發(fā)布時間：

2022-03-14

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觀察脂聯(lián)素受體1（adiponectin receptor1,AdipoR1）沉默對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞增殖、凋亡的影響

　　目的 :
　　觀察脂聯(lián)素受體1（adiponectin receptor1,AdipoR1）沉默對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導(dǎo)的人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞增殖、凋亡的影響。（推薦閱讀：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞）
　　方法:
　　（1）利用免疫熒光、Western blot鑒定并驗(yàn)證shRNA技術(shù)對構(gòu)建的AdipoR1沉默（sh-AdipoR1組）細(xì)胞的干擾效率;
　　（2）分別用CCK8試劑盒、流式細(xì)胞儀檢測LPS（100 ng/m L）對sh-AdipoR1組及空載病毒對照（sh-NC組）細(xì)胞增殖及凋亡的影響;
　　（3）利用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)法（real-time polymerase chain reaction,realtime PCR）檢測LPS對sh-AdipoR1及sh-NC組細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因BCL-2、BCL-XL、BAX、BAK表達(dá)的影響。同時設(shè)置無LPS刺激的sh-NC、sh-AdipoR1組作為對照。
　　結(jié)果:
　　（1）熒光顯微鏡下可見sh-AdipoR1組細(xì)胞熒光蛋白表達(dá)效率趨近于100%,Western blot檢測結(jié)果顯示:與sh-NC組相比,sh-AdipoR1組AdipoR1蛋白的表達(dá)顯著下降（P<0.05）,表明AdipoR1沉默的細(xì)胞構(gòu)建成功;
　　（2）無LPS刺激情況下,sh-NC組與sh-AdipoR1組細(xì)胞增殖速率及凋亡細(xì)胞比例無明顯差異;LPS刺激可顯著增加sh-NC組和sh-AdipoR1組細(xì)胞相對增殖速率及凋亡細(xì)胞比例（P<0.05）;在LPS作用24、48 h,sh-AdipoR1組細(xì)胞增殖速率均顯著低于sh-NC組（P<0.05）,而sh-AdipoR1組細(xì)胞凋亡率顯著高于sh-NC組（P<0.05）;
　　（3）real-time PCR結(jié)果顯示,無LPS刺激情況下,sh-NC組與sh-AdipoR1組抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL與促進(jìn)凋亡基因BAK、BAX的相對表達(dá)量均無顯著差異（P>0.05）;LPS刺激可降低抑凋亡基因BCL-2、BCL-XL表達(dá),增加促凋亡基因BAX、BAK表達(dá)（P<0.05）;在LPS誘導(dǎo)下與sh-NC組相比,sh-AdipoR1組抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL表達(dá)下降,促凋亡基因BAX、BAK表達(dá)顯著升高（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　AdipoR1基因的沉默可抑制LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,并提示AdipoR1相關(guān)信號通路可能在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中起到重要作用,阻斷該途徑可有效阻斷LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)。
　　關(guān)鍵詞：脂聯(lián)素受體1; 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎; 滑膜成纖維細(xì)胞; 細(xì)胞增殖; 細(xì)胞凋亡;