研究肝組織慢性乙型肝炎肝內(nèi)ccDNA關(guān)系探討ccCDNA在CHB診斷和治療中的重要臨床價(jià)值

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2022-03-16

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應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）方法檢測(cè)慢性乙型肝炎（CHB）肝組織HBVcccDNA 定量，研究肝組織 HBVcccDNA定量與組織及血清 HBV DNA定量、HBsAg滴度、肝實(shí)質(zhì)損害程度及肝組織病理等的關(guān)系，以探討 cccDNA 在 CHB 診斷和治療中的重要臨床價(jià)值

　　【主題】
　　慢性乙型肝炎肝內(nèi)ccDNA定量測(cè)定的臨床意義研究
　　【目的】
　　乙型肝炎病毒（HBV）感染的分子生物學(xué)研究表明，在 HBV持續(xù)性感染、治療停止后病情反跳以及耐藥方面，共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA（cccDNA）起著關(guān)鍵的作用。目前有關(guān)cccDNA 的了解多來源于土撥鼠和鴨乙型肝炎病毒動(dòng)物模型的研究，但從病人中收集的資料很少，國(guó)內(nèi)還未有相關(guān)報(bào)道。應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ-PCR）方法檢測(cè)慢性乙型肝炎（CHB）肝組織HBVcccDNA 定量，研究肝組織 HBVcccDNA定量與組織及血清 HBV DNA定量、HBsAg滴度、肝實(shí)質(zhì)損害程度及肝組織病理等的關(guān)系，以探討 cccDNA 在 CHB 診斷和治療中的重要臨床價(jià)值。(推薦閱讀：HBV模型、AAV/HBV誘導(dǎo)的慢性HBV感染嚙齒動(dòng)物模型)
　　【方法】
　　75例CHB患者均來自我院2004年1月~8月住院病人，男59例，女16例，年齡17～48歲，平均33歲。所有患者診斷符合2000年第十次全國(guó)病毒性肝炎學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的《病毒性肝炎防治方案》，并排除甲、丙、丁、戊型肝炎和其他原因所致肝損害。所有病例院外半年內(nèi)未行抗病毒治療，根據(jù)HBeAg的情況，分為HBeAg陽性慢性乙型肝炎和HBeAg陰性慢性乙型肝炎兩組，兩組資料在年齡、性別、病程等方面均具有可比性。10例非乙肝患者包括∶丙肝2例，自身免疫性肝炎1例，脂肪肝3例，酒精肝2例，不明原因肝損害2例作為對(duì)照。應(yīng)用Rochelight-cycler熒光PCR檢測(cè)儀檢測(cè)肝組織cccDNA、組織和血清HBV DNA的拷貝數(shù)。
　　全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝功能（ALT等指標(biāo)）、Roche全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)血清HBsAg滴度、肝組織進(jìn)行炎癥活動(dòng)度分級(jí)（G）及纖維化程度分期（S）等，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　【結(jié)果】
　　1.慢性乙型肝炎患者肝組織均檢測(cè)到cccDNA，定量為1.56×10°拷貝/mg～3.04×10"拷貝/mg（對(duì)數(shù)值∶4.45±1.23）;肝組織HBVDNA定量3.12×10'拷貝/mg～2.34×10'拷貝/mg（對(duì)數(shù)值;4.89±1.29）;血清HBVDNA定量是3.95×10'拷貝/ml~5.34×10"拷貝/ml（對(duì)數(shù)值∶5.12±1.43）。
　　2.肝組織ccDNA定量與組織、血清HBW DNA定量的相關(guān)性;肝組織cccDNA定量與組織HBVDNA定量呈高度相關(guān)（對(duì)數(shù)值∶4.45±1.23與4.89±1.29，r=0.737，R0.001）;肝組織cccDNA定量與血清HBV DNA定量亦呈正相關(guān)（4.45±1，23與5.12±1.43，r=0.427，R0.005）。
　　3.HBeAg 陽性患者肝組織cccDNA定量（對(duì)數(shù)值∶5.33±1.17）、肝組織 HBVDNA 定量（對(duì)數(shù)值∶6.12±1.2）、血清HBVDNA定量（對(duì)數(shù)值∶6.50±1.56）高于HBeAg 陰性患者肝組織cccDNA 定量（對(duì)數(shù)值∶3.56±1.28）、肝組織HBVDNA 定量（對(duì)數(shù)值∶4.24±1.34）和血清HBVDNA定量（對(duì)數(shù)值∶4.34±1.64）;兩兩比較差異均有顯著性（R0.05）。
　　4、血清HBsAg滴度均值;762±201.35COI。肝組織cccDNA定量與血清HBsAg 滴度的關(guān)系∶肝組織cccDNA定量與血清HBshg滴度呈正相關(guān)（r=0.718，P<0.005）。
　　5.肝組織cccDNA定量與肝實(shí)質(zhì)損害指標(biāo)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）、血漿凝血酶原時(shí)間（PT）均不具相關(guān)性（P>0，05）。
　　6.肝組織cccDNA定量與肝組織病理的關(guān)系;肝組織cccONA定量與肝組織炎癥活動(dòng)度《G）及纖維化程度（S）無明顯關(guān)系。
　　【結(jié)論】
　　1.肝組織cccDNA 定量水平可直接反映體內(nèi) HBV 感染及復(fù)制情況，是較血清HBV DNA、HBeAg 更可靠的指標(biāo)，存在 HBVcccDNA 是判斷 HBV 感染的金標(biāo)準(zhǔn)，尤其在血清 HBV DNA 低至檢測(cè)水平以下時(shí)，cccDNA 在 CHB 診斷和抗病毒治療中具有重要臨床價(jià)值和意義。
　　2.肝組織cccDNA定量與血清 HBV DNA定量呈正相關(guān)，在臨床上動(dòng)態(tài)檢測(cè)慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA 負(fù)荷，有利于了解其肝組織 cccDNA負(fù)荷的變化∶但是由于乙型肝炎患者 HBV DNA和肝組織中cccDNA水平相關(guān)性不太強(qiáng)，不能通過血清HBV DNA 負(fù)荷來妄加推測(cè)肝組織 cccDNA 負(fù)荷水平。
　　3.HBeAg陽性患者肝組織cccDNA定量、組織和血清HBV DNA定量均比HBeAg陰性患者較高，證實(shí)了HBeAg是病毒在體內(nèi)高度復(fù)制的指標(biāo)之一;抗-HBeAg（+）表明病毒復(fù)制減弱，傳染性降低，但抗-HBeAg（+）的病例仍可檢出HBVDNA、ccDNA，仍有較強(qiáng)傳染性和病毒復(fù)制力，也具有肝損傷持續(xù)存在，呈現(xiàn)慢性化或肝硬化的趨勢(shì)。
　　4.肝組織cccDNA定量與血清HBsAg滴度相關(guān)性較強(qiáng)，血清HBsAg滴度可能在一定程度上反映肝組織cccDNA定量的狀況。
　　5.肝組織cccDNA定量與肝實(shí)質(zhì)損害程度與肝組織病理均不具相關(guān)性，cccDNA水平不能作為慢乙肝肝組織病變程度的預(yù)測(cè)指標(biāo)，提示非細(xì)胞溶解機(jī)制清除cccDNA占一定地位。
　　【關(guān)鍵詞】肝炎，乙型，慢性;熒光定量聚合酶鏈反應(yīng);肝炎病毒，乙型;cccDNA;肝功能;肝組織