大黃素可通過抑制NF-B信號(hào)通路活化抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞增殖和炎癥反應(yīng)

發(fā)布時(shí)間：

2022-03-23

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大黃素可能通過抑制 NF-B信號(hào)通路的活化抑制HFLS-RA 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖和炎癥反應(yīng)。

　　目的
　　探討大黃素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖的影響。方法將人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜 HFLSRA 細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組（未處理）、誘導(dǎo)組（TNF-α處理）、25 μmol/L 大黃素組（TNF-α和大黃素處理）、50 μmol/L大黃素組（TNF-α和大黃素處理）和100 μmol/L大黃素組（TNF-α和大黃素處理）。采用 MTT法和克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的存活率和克隆形成率，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率，RT-PCR 檢測(cè)凋亡相關(guān)基因 Bcl-2 和 Bax mRNA的表達(dá)，ELISA 檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-6和IL-β 水平，Western blot 檢測(cè)細(xì)胞中 NF-B信號(hào)通路相關(guān)蛋白 p-HkBα和 p-NF水B p65的表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1.大黃素對(duì) HFLS-RA 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖的影響 MT檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，誘導(dǎo)組細(xì)胞的存活率升高（P<0.05）;與誘導(dǎo)組比較，25、50、100 wmol/L 大黃素處理組細(xì)胞的存活率下降（P<0.05）。同時(shí)，克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，誘導(dǎo)組細(xì)胞的克隆形成率較對(duì)照組升高（P<0.05）;而給予25、50、100 μmol/L大黃素處理后，HFLS-RA細(xì)胞的克隆形成率較誘導(dǎo)組均降低（P<0.05）。隨著大黃素濃度的增加，HFLS-RA細(xì)胞的存活率和克隆形成率越低。見表1。

　　2.大黃素對(duì)HFIS-RA 細(xì)胞凋亡的影響流式細(xì)胞儀（圖 2）檢測(cè)對(duì)照組、誘導(dǎo)組、25 μmol/L 大黃素組、50 μmol/L大黃素組和 100 μmol/L大黃素組細(xì)胞的凋亡率存在差異（P<0.05），與對(duì)照組比較，誘導(dǎo)組細(xì)胞的凋亡率降低（P<0.05）;與誘導(dǎo)組比較，25、50、100 μmol/L 大黃素組細(xì)胞的凋亡率均升高（P<0.05），且呈濃度依賴性。結(jié)果見圖1、表1。

　　3.大黃素對(duì)HFLS-RA 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響RTPCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，誘導(dǎo)組細(xì)胞中 Bcl-2 mRNA 的表達(dá)水平高于對(duì)照組（P<0.05），而 Bax mRNA 表達(dá)低于對(duì)照組（P<0.05）;隨25、50、100 μmol/L大黃素濃度的升高，HFLS-RA 細(xì)胞中 Bcl-2 mRNA逐漸降低，而Bax mRNA表達(dá)逐漸升高，與誘導(dǎo)組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

　　3.4 大黃素對(duì)HFLS-RA細(xì)胞上清液中I-6和I-1β水平的影響與對(duì)照組比較，誘導(dǎo)組中 IL-6和Ⅱ-1β 水平升高（（P<0.05）;而大黃素組較誘導(dǎo)組降低（P<0.05），且大黃素濃度越高降低幅度越明顯。見表3。

　　5.大黃素對(duì)HFLS-RA 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞中 NF-B信號(hào)通路的影響與對(duì)照組比較，誘導(dǎo)組細(xì)胞中 p-kBα 和 p-NF-B p65蛋白的表達(dá)升高（P<0.05）;與誘導(dǎo)組比較，25、50、100 μmol/L大黃素組細(xì)胞中 p-kBα和 p-NF+B p65 蛋白的表達(dá)下降（P<0.05），且呈濃度依賴性。見圖2、表4。

　　結(jié)論
　　大黃素可能通過抑制 NF-B信號(hào)通路的活化抑制HFLS-RA 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖和炎癥反應(yīng)。
　　關(guān)鍵詞∶大黃素;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎;HFLS-RA 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞;炎性因子;NF-B信號(hào)通路