通過乳腺癌 MCF-7細(xì)胞系建立乳腺癌裸鼠皮下移植瘤動物模型 CYB5D2 對乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠腫瘤生長的影響

發(fā)布時(shí)間：

2022-06-06

來源：

專業(yè)提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB細(xì)胞庫源細(xì)胞、動物實(shí)驗(yàn)、CRO服務(wù)、SCI潤色)

作者：

【如需咨詢購買細(xì)胞或技術(shù)服務(wù),請點(diǎn)擊24小時(shí)客服咨詢或留言哦】

閱讀數(shù)：

上調(diào)CYB5D2基因可有效抑制乳腺癌皮下移植模型大鼠瘤體生長，推測上調(diào)CYB5D2 基因可能通過下調(diào) N-cadherin、Snail、MMP2及 MMP9，上調(diào) E -cadherin、β-catenin，逆轉(zhuǎn) EMT，發(fā)揮抗腫瘤功效

　　摘要∶
　　CYB5D2蛋白是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，可通過抑制細(xì)胞增殖促進(jìn)神經(jīng)元分化，隨著研究深入，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)1-司CYB5D2 還參與乳腺癌、宮頸癌、肝癌等多種惡性腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展，是多種腫瘤的候選抑癌因子。上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial- mesenchymal transition，EMT）是惡性腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程中的重要病理機(jī)制，EMT過程中，上皮細(xì)胞極性喪失，同時(shí)獲得浸潤性與遷移能力團(tuán)。
　　為研究 CYB5D2是否通過EMT來調(diào)控乳腺癌的發(fā)生及發(fā)展，筆者建立 20 只乳腺癌皮下轉(zhuǎn)移瘤動物模型大鼠，通過分析不同處理組大鼠轉(zhuǎn)移瘤組織內(nèi) EMT相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)情況，探究CYB5D2 在乳腺癌中作用機(jī)制。
　　目的：
　　研究CYB5D2對乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠腫瘤生長的影響。
　　方法：
　　通過乳腺癌 MCF-7細(xì)胞系建立乳腺癌裸鼠皮下移植瘤動物模型。將含有CYB5D2 表達(dá)的質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 MCF-7細(xì)胞，多點(diǎn)注射，將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞注入裸鼠皮下，作為觀察組，同時(shí)設(shè)置 shRNA-CYB5D2陰性質(zhì)粒為陰性對照組，PBS為空白對照組。測量各組大鼠腫瘤體積及質(zhì)量;裸鼠轉(zhuǎn)移瘤模型建立成功后處死小鼠，qRT-CPR 法檢測腫瘤組織內(nèi)CYB5D2 mRNA 表達(dá)水平;Western Blot 法檢測各組裸鼠轉(zhuǎn)移瘤組織內(nèi)上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）標(biāo)志表白表達(dá)情況，酶聯(lián)免疫吸附法檢測裸鼠轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞上清液中MMP-2及 MMP-9水平。

　　結(jié)果：
　　觀察組轉(zhuǎn)移瘤平均體積及質(zhì)量顯著低于陰性組與空白組（P<0.05），陰性組與空白組裸鼠轉(zhuǎn)移瘤體積及質(zhì)量無明顯差異（P>0.05）。提取試驗(yàn)小鼠腫瘤組織總 RNA，qRT-CPR 法檢測提示觀察組腫瘤組織內(nèi)CYB5D2 mRNA表達(dá)量顯著高于陰性組及空白對照組（P<0.05），而陰性組與空白組間差異無顯著性差異（P>0.05）;Western Blot 法檢測結(jié)果顯示，觀察組轉(zhuǎn)移瘤組織內(nèi)E-cadherin、β-catenin 蛋白表達(dá)水平顯著高于與陰性組及空白組（P<0.05），而N-cadherin 及 Snail蛋白表達(dá)顯著低于與陰性組及空白組（P<0.05）。陰性組與空白組轉(zhuǎn)移瘤組織內(nèi)E-cadherin、β-catenin、N-cadherin及 Snail 蛋白表達(dá)無顯著性差異（P>0.05）;觀察組裸鼠轉(zhuǎn)移瘤細(xì)胞上清液中 MMP-2及 MMP-9水平顯著低于與陰性組及空白組（P<0.05）），而陰性組與對照組 MMP-2 及 MMP-9水平無顯著性差異（P>0.05。
　　結(jié)論：
　　上調(diào)CYB5D2基因可有效抑制乳腺癌皮下移植模型大鼠瘤體生長，推測上調(diào)CYB5D2基因可能通過下調(diào)N-cadherin、Snail、MMP2及 MMP9，上調(diào)E-cadherin、β-catenin，逆轉(zhuǎn) EMT，發(fā)揮抗腫瘤功效。
　　關(guān)鍵詞∶
　　CYB5D2;乳腺癌;皮下移植瘤大鼠動物模型;腫瘤生長
　　討論：
　　乳腺癌已成為女性群體中發(fā)病率最高的惡性病變，嚴(yán)重威脅女性生命健康。探究乳腺癌病因，尋找有效的治療方法一直是臨床研究的住點(diǎn)。本文通過小鼠肩胛皮下組織注射乳腺癌 MCF-7細(xì)胞，建立乳腺癌皮下轉(zhuǎn)移瘤模型大鼠，并在體外構(gòu)建 CYB5D2 基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染上調(diào)的 MCF-7細(xì)胞與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染下調(diào)的 MCF-7 細(xì)胞;分別注射至乳腺癌皮下轉(zhuǎn)移痛模型大做皮下組織，并設(shè)置為觀察組、陰性組及空白組（注射空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的 MCF-7細(xì)胞）。注射完畢后第5d開始測量模型大鼠轉(zhuǎn)移瘤體積及重量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與陰性組及空白組相比，注射 CYB5D2基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染上調(diào) MCF-7細(xì)胞的觀察組大鼠轉(zhuǎn)移瘤體積及重量明顯減輕，提示 CYB5D2基因表達(dá)上調(diào)可有效抑制乳腺癌腫瘤的生長。
　　EMIT是上皮源惡性腫痛發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的預(yù)程序，經(jīng)歷 EMIT 反應(yīng)的腫瘤細(xì)胞，其上皮性表性標(biāo)志蛋白包括E-cdherin、B-catenin、Cladin 等表達(dá)水平將明顯下降，與此同時(shí)，間質(zhì)性表型蛋白如 N-cadherin、Vimentin 等表達(dá)水平上升-0。其中E-cadherin是腫瘤細(xì)胞 EMTT進(jìn)程中的關(guān)鍵蛋白，E一cadherin 蛋白在浸潤性癌細(xì)胞系中的重新表達(dá)可有效降低浸潤性細(xì)胞體外侵襲能力以。B-catenin 則可直接與E-cadherin 結(jié)合為復(fù)合物，保障細(xì)胞間緊密相連，同時(shí)，β-catenin 還是 Wnt 信號通路的核心蛋白，可激活Wnt 途徑，誘導(dǎo) EMIT轉(zhuǎn)錄因子 Snail、Twit 等表達(dá)產(chǎn)物四。其中 Snal是一種含鋅指結(jié)構(gòu)的DNA結(jié)合蛋白，具有抑制E-cadheri蛋白啟動子活性的生物功能，誘導(dǎo)EMT發(fā)生貝。檢測組織細(xì)胞EMT相關(guān)蛋白表達(dá)情況，可有效判斷其EMT狀況，推測目的基因在乳腺癌發(fā)生及發(fā)展中的作用
　　本文研究發(fā)現(xiàn)，觀察組乳腺癌轉(zhuǎn)移瘤瘤體細(xì)胞內(nèi)E-cadherin、β-calenin蛋白表達(dá)水平顯著高于與陰性組及空白組，而N-cadherin及Snail蛋白表達(dá)顯著低于與陰性組及空白組。提示上調(diào)CYB5D2 基因可能上調(diào)E-cadberin、β-catenin蛋白，下調(diào)N -cadherin及Snail蛋白，進(jìn)而抑制乳腺癌裸鼠皮下轉(zhuǎn)移瘤的生長。
　　此外，金屬基質(zhì)蛋白酶家族（MMPs）是腫瘤侵潤及轉(zhuǎn)移的敏感標(biāo)志物，其可重塑腫瘤微環(huán)境，并誘導(dǎo)大量血管生長，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤浸潤及轉(zhuǎn)移D-四. MMP-2及MMP-9是MMPs中最重要的兩個(gè)成員。有研究顯示叫，MMP9與卵巢癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，且與Snail呈正相關(guān)，與E-cadherin呈負(fù)相關(guān)。Liu D等研究發(fā)現(xiàn)，MMP2可通過EMT途徑促使肝癌侵襲及轉(zhuǎn)移。總而言之，MMP2及MMP9 在惡性腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移中具有重要意義。本文研究發(fā)現(xiàn)，觀察組試驗(yàn)大鼠移植瘤組織細(xì)胞內(nèi)MMP2及MMP9濃度均顯著低于陰性組及對照組，提示上調(diào)CYB5D2基因可有效減輕乳腺癌組織內(nèi)MMP2及MMP表達(dá)，推測上調(diào)CYB5D2基因可抑制乳腺癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論：
　　上調(diào)CYB5D2基因可有效抑制乳腺癌皮下移植模型大鼠瘤體生長，推測上調(diào)CYB5D2 基因可能通過下調(diào) N-cadherin、Snail、MMP2及 MMP9，上調(diào) E -cadherin、β-catenin，逆轉(zhuǎn) EMT，發(fā)揮抗腫瘤功效。