蒼術(shù)酮對(duì)肝癌荷瘤小鼠腫瘤體積和質(zhì)量的影響

發(fā)布時(shí)間：

2022-06-13

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研究蒼術(shù)酮對(duì)肝癌荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transition，EMT）和凋亡標(biāo)志物表達(dá)的影響

　　摘要：
　　原發(fā)性肝癌是高病死率的惡性腫瘤之一，給世界各國(guó)人民的健康帶來(lái)極大危害。我國(guó)是原發(fā)性肝癌的重災(zāi)區(qū)，患者數(shù)量和病死率均占世界前列。
　　目前肝癌治療尚無(wú)特效藥，基本采用綜合治療方案，早期以手術(shù)治療為主，對(duì)無(wú)法手術(shù)或者不能耐受手術(shù)的，采用TACE、姑息治療和綜合對(duì)癥處理，以此控制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，延長(zhǎng)患者生存期。肝癌是一種具有高轉(zhuǎn)移潛能的惡性腫瘤，其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是大多數(shù)肝癌患者治療失敗和死亡的主要原因。上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transition，EMT）被認(rèn)為是腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散的初始步驟，可導(dǎo)致惡性腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，因此抑制腫瘤細(xì)胞EMT的發(fā)生對(duì)腫瘤的治療具有積極意義。（推薦閱讀：FAO大鼠肝癌細(xì)胞、Li-7人肝癌細(xì)胞、肝癌原位模型）
　　在肝癌的預(yù)防治療中，從中醫(yī)藥寶庫(kù)中發(fā)掘有效的輔助治療方法，無(wú)疑是其發(fā)展方向之一。蒼術(shù)為菊科草本植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis（DC.）Koidz.的干燥塊莖，味辛、苦，性溫，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒的功效，是臨床許多中藥方劑的重要組成部分。蒼術(shù)酮是從蒼術(shù)中分離得到的倍半萜類(lèi)有效成分，現(xiàn)代藥理研究表明，蒼術(shù)酮具有保肝、抗病毒和抗腫瘤等多種藥理活性。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)酮可抑制肝癌HepG2細(xì)胞的增殖和遷移，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。
　　本研究擬在既往研究基礎(chǔ)上，通過(guò)在非肥胖糖尿病/重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠（non-obese diabetes/server combined immune deficiency，NOD/SCID）小鼠左側(cè)背部皮下種植HepG2細(xì)胞懸液的方法制備肝癌荷瘤小鼠動(dòng)物模型，以進(jìn)一步研究在此動(dòng)物模型中蒼術(shù)酮對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、EMT和凋亡的影響。

　　目的∶
　　研究蒼術(shù)酮對(duì)肝癌荷瘤小鼠腫瘤生長(zhǎng)、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial mesenchymal transition，EMT）和凋亡標(biāo)志物表達(dá)的影響。
　　方法∶
　　在非肥胖糖尿病/重癥聯(lián)合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠左側(cè)背部，皮下種植100 μL的HepG2細(xì)胞懸液（1×10/只）。當(dāng)注射位置腫瘤生長(zhǎng)到50~100 mm?之后，將18只小鼠隨機(jī)分成對(duì)照組、蒼術(shù)酮低劑量組（低劑量組）和蒼術(shù)酮高劑量組（高劑量組），每組6只。蒼術(shù)酮溶于玉米油中，低、高劑量組分別按照5、10mg/kg劑量灌胃給藥;對(duì)照組僅給予玉米油灌胃。每日1 次，共15d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠，采集腫瘤瘤體組織待測(cè)。部分腫瘤組織置福爾馬林中固定，石蠟包埋切片，進(jìn)行免疫組化染色，用于檢測(cè)Ki-67。部分腫瘤組織進(jìn)行裂解抽提總蛋白，采用BCA法測(cè)定蛋白濃度，10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，半干法轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜，Westerm Blot法檢測(cè)EMT標(biāo)志物（E鈣黏蛋白、N鈣黏蛋白、波形蛋白和α-SMA）、EMT促進(jìn)因子（MMP-2、MMP-9和TIMP-2）和凋亡相關(guān)因子（Bcl-2、Bax和裂解Caspase-3）的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果∶蒼術(shù)酮治療后荷瘤小鼠皮下腫瘤的體積和質(zhì)量均明顯下降，其作用呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性。蒼術(shù)酮組Ki-67陽(yáng)性染色面積均顯著縮小.尤其以高劑量組最為明顯。
　　檢測(cè)結(jié)果顯示，蒼術(shù)酮干預(yù)顯著上調(diào)了上皮標(biāo)記物（E鈣黏蛋白）的表達(dá)，下調(diào)了間充質(zhì)標(biāo)記物（N-鈣黏蛋白、波形蛋白和α-SMA）的表達(dá);顯著增加了TIMP-2的表達(dá)，降低了MMP-2和MMP-9的表達(dá);降低了Bcl-2的表達(dá)水平，顯著增加了Bax和裂解Capase-3的表達(dá)水平。
　　結(jié)論
　　蒼術(shù)酮具有一定的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)，可抑制EMT和降低MMP減少肝癌細(xì)胞遷移和侵襲，通過(guò)凋亡途徑促進(jìn)肝癌細(xì)胞的凋亡。
　　關(guān)鍵詞
　　蒼術(shù)酮;肝癌;荷瘤小鼠;上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化;細(xì)胞凋亡