雙酚A BPA誘發(fā)大鼠卵巢儲(chǔ)備功能下降DOR動(dòng)物模型的最佳制備方案并明確其中醫(yī)證候?qū)傩?

發(fā)布時(shí)間：

2022-08-17

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專業(yè)提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB細(xì)胞庫(kù)源細(xì)胞、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、CRO服務(wù)、SCI潤(rùn)色)

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DOR可導(dǎo)致育齡婦女過早出現(xiàn)月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)并伴隨不孕，降低輔助生殖技術(shù)的成功率，盡早干預(yù)會(huì)避免其繼續(xù)發(fā)展成卵巢早衰"1。臨床實(shí)踐表明，中醫(yī)藥治療DOR具有很好的臨床療效*2，但探討DOR的病因病機(jī)和中醫(yī)藥作用機(jī)制需要?jiǎng)游锬Ｐ偷闹С帧?

　　摘要
　　卵巢儲(chǔ)備功能下降（DOR）是指卵巢內(nèi)存留的可募集的卵泡數(shù)量和（或）卵母細(xì)胞質(zhì)量下降，臨床表現(xiàn)以月經(jīng)異常、不孕癥和圍絕經(jīng)期類不適為主。該病發(fā)病率逐年升高，且有低齡化發(fā)展趨勢(shì)21，若不及早進(jìn)行有效干預(yù)，可在1~5年發(fā)展為卵巢早衰31，是婦科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)之一。
　　雙酚A（BPA）是當(dāng)前環(huán)境普遍存在的環(huán)境污染物L(fēng)，現(xiàn)有研究證實(shí)其對(duì)卵巢功能有不利影響【。2018年5月—2021年12月，本團(tuán)隊(duì)擬在此基礎(chǔ)上構(gòu)建一種新的DOR病證結(jié)合動(dòng)物模型并分析其證候?qū)傩裕云跒檫M(jìn)一步挖掘中醫(yī)藥對(duì)抗環(huán)境污染、保護(hù)女性生育力提供依據(jù)。
　　目的
　　探討雙酚A（BPA）誘發(fā)大鼠卵巢儲(chǔ)備功能下降（DOR）動(dòng)物模型的最佳制備方案，并明確其中醫(yī)證候?qū)傩浴?br /> 　　方法
　　選擇動(dòng)情周期規(guī)律的3、6月齡雌性清潔SD大鼠各18只，不同月齡分別按隨機(jī)數(shù)字表法分為低、中、高劑量組。低、中、高劑量組每日分別給予50、100、200my/kg BPA混懸液灌胃，均每日灌胃1次，至大鼠動(dòng)情周期紊亂。觀察大鼠一般情況；陰道涂片觀察大鼠動(dòng)情周期；取大鼠腹主動(dòng)脈血，分離血清，用ELISA法檢測(cè)血清促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E，）、抗苗勒氏管激素（AMH）、抑制素-B（INHB）；取雙側(cè)卵巢組織形態(tài)，測(cè)算各級(jí)卵泡比例、卵巢指數(shù)。選擇觀察指標(biāo)變化最明顯組所用的模型制備方法為最佳方法。將造模成功的18只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、右歸丸組、養(yǎng)精種玉湯組，每組6只，分別給予蒸餾水、治療腎陽(yáng)虛的右歸丸、治療腎陰虛的養(yǎng)精種玉湯按ImL/100g體質(zhì)量灌胃，連續(xù)2周。對(duì)比各組動(dòng)情周期變化，腎陽(yáng)虛癥狀，卵巢組織形態(tài)、卵巢指數(shù)、各級(jí)卵泡比例，血清激素、INHB、AMH水平。
　　結(jié)果
　　3、6月齡各BPA干預(yù)組大鼠活動(dòng)減少，喜蜷臥扎堆。3月齡中劑量BPA組動(dòng)情周期紊亂時(shí)間較其他組短；AMH水平最低，原始卵泡最少，閉鎖卵泡最多，因此3月齡中劑量BPA組的模型制備方法最佳。模型組大鼠實(shí)驗(yàn)期間持續(xù)處于動(dòng)情周期紊亂狀態(tài)，養(yǎng)精種玉湯組大鼠有1 只恢復(fù)規(guī)律動(dòng)情周期，右歸丸組有5只大鼠恢復(fù)規(guī)律動(dòng)情周期。右歸丸組大鼠規(guī)律動(dòng)情周期恢復(fù)數(shù)量（5只）高于對(duì)照組（無）、養(yǎng)精種玉湯組（1只），腎陽(yáng)虛癥狀明顯改善。模型組大鼠卵巢蒼白，體積變小，質(zhì)硬右歸丸組大鼠卵巢顏色紅潤(rùn)，體積變大，組織彈性好，表面有多個(gè)生長(zhǎng)卵泡養(yǎng)精種玉湯組大鼠卵巢表面生長(zhǎng)卵泡少，組織彈性差。與對(duì)照組、養(yǎng)精種玉湯組比較，右歸丸組大鼠原始卵泡比例高、閉鎖卵泡比例低，AMH水平高（P均<05）。結(jié)論 3 月齡SD大鼠每日以100mg/kg的BPA灌胃可成功制備DOR動(dòng)物模型，以方測(cè)證表明該動(dòng)物模型的中醫(yī)證候?qū)傩詾槟I陽(yáng)虛型。