研究肝組織慢性乙型肝炎肝內ccDNA關系 探討ccCDNA在CHB診斷和治療中的重要臨床價值
發布時間：
2022-03-16
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【主題】
慢性乙型肝炎肝內ccDNA定量測定的臨床意義研究
【目的】
乙型肝炎病毒（HBV）感染的分子生物學研究表明，在 HBV持續性感染、治療停止后病情反跳以及耐藥方面，共價閉合環狀 DNA（cccDNA）起著關鍵的作用。目前有關cccDNA 的了解多來源于土撥鼠和鴨乙型肝炎病毒動物模型的研究，但從病人中收集的資料很少，國內還未有相關報道。應用熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）方法檢測慢性乙型肝炎（CHB）肝組織HBVcccDNA 定量，研究肝組織 HBVcccDNA定量與組織及血清 HBV DNA定量、HBsAg滴度、肝實質損害程度及肝組織病理等的關系，以探討 cccDNA 在 CHB 診斷和治療中的重要臨床價值。(推薦閱讀：HBV模型、AAV/HBV誘導的慢性HBV感染嚙齒動物模型)
【方法】
75例CHB患者均來自我院2004年1月~8月住院病人，男59例，女16例，年齡17～48歲，平均33歲。所有患者診斷符合2000年第十次全國病毒性肝炎學術會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》，并排除甲、丙、丁、戊型肝炎和其他原因所致肝損害。所有病例院外半年內未行抗病毒治療，根據HBeAg的情況，分為HBeAg陽性慢性乙型肝炎和HBeAg陰性慢性乙型肝炎兩組，兩組資料在年齡、性別、病程等方面均具有可比性。10例非乙肝患者包括∶丙肝2例，自身免疫性肝炎1例，脂肪肝3例，酒精肝2例，不明原因肝損害2例作為對照。應用Rochelight-cycler熒光PCR檢測儀檢測肝組織cccDNA、組織和血清HBV DNA的拷貝數。
全自動生化分析儀檢測肝功能（ALT等指標）、Roche全自動電化學發光免疫分析儀檢測血清HBsAg滴度、肝組織進行炎癥活動度分級（G）及纖維化程度分期（S）等，進行統計學分析。
【結果】
1.慢性乙型肝炎患者肝組織均檢測到cccDNA，定量為1.56×10°拷貝/mg～3.04×10"拷貝/mg（對數值∶4.45±1.23）;肝組織HBVDNA定量3.12×10'拷貝/mg～2.34×10'拷貝/mg（對數值;4.89±1.29）;血清HBVDNA定量是3.95×10'拷貝/ml~5.34×10"拷貝/ml（對數值∶5.12±1.43）。
2.肝組織ccDNA定量與組織、血清HBW DNA定量的相關性;肝組織cccDNA定量與組織HBVDNA定量呈高度相關（對數值∶4.45±1.23與4.89±1.29，r=0.737，R0.001）;肝組織cccDNA定量與血清HBV DNA定量亦呈正相關（4.45±1，23與5.12±1.43，r=0.427，R0.005）。
3.HBeAg 陽性患者肝組織cccDNA定量（對數值∶5.33±1.17）、肝組織 HBVDNA 定量（對數值∶6.12±1.2）、血清HBVDNA定量（對數值∶6.50±1.56）高于HBeAg 陰性患者肝組織cccDNA 定量（對數值∶3.56±1.28）、肝組織HBVDNA 定量（對數值∶4.24±1.34）和血清HBVDNA定量（對數值∶4.34±1.64）;兩兩比較差異均有顯著性（R0.05）。
4、血清HBsAg滴度均值;762±201.35COI。肝組織cccDNA定量與血清HBsAg 滴度的關系∶肝組織cccDNA定量與血清HBshg滴度呈正相關（r=0.718，P<0.005）。
5.肝組織cccDNA定量與肝實質損害指標血清谷丙轉氨酶（ALT）、總膽紅素（TBIL）、血漿凝血酶原時間（PT）均不具相關性（P>0，05）。
6.肝組織cccDNA定量與肝組織病理的關系;肝組織cccONA定量與肝組織炎癥活動度《G）及纖維化程度（S）無明顯關系。
【結論】
1.肝組織cccDNA 定量水平可直接反映體內 HBV 感染及復制情況，是較血清HBV DNA、HBeAg 更可靠的指標，存在 HBVcccDNA 是判斷 HBV 感染的金標準，尤其在血清 HBV DNA 低至檢測水平以下時，cccDNA 在 CHB 診斷和抗病毒治療中具有重要臨床價值和意義。
2.肝組織cccDNA定量與血清 HBV DNA定量呈正相關，在臨床上動態檢測慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA 負荷，有利于了解其肝組織 cccDNA負荷的變化∶但是由于乙型肝炎患者 HBV DNA和肝組織中cccDNA水平相關性不太強，不能通過血清HBV DNA 負荷來妄加推測肝組織 cccDNA 負荷水平。
3.HBeAg陽性患者肝組織cccDNA定量、組織和血清HBV DNA定量均比HBeAg陰性患者較高，證實了HBeAg是病毒在體內高度復制的指標之一;抗-HBeAg（+）表明病毒復制減弱，傳染性降低，但抗-HBeAg（+）的病例仍可檢出HBVDNA、ccDNA，仍有較強傳染性和病毒復制力，也具有肝損傷持續存在，呈現慢性化或肝硬化的趨勢。
4.肝組織cccDNA定量與血清HBsAg滴度相關性較強，血清HBsAg滴度可能在一定程度上反映肝組織cccDNA定量的狀況。
5.肝組織cccDNA定量與肝實質損害程度與肝組織病理均不具相關性，cccDNA水平不能作為慢乙肝肝組織病變程度的預測指標，提示非細胞溶解機制清除cccDNA占一定地位。
【關鍵詞】肝炎，乙型，慢性;熒光定量聚合酶鏈反應;肝炎病毒，乙型;cccDNA;肝功能;肝組織
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