IBD動物模型構(gòu)建攻略—吉妮歐生物技術(shù)實踐
發(fā)布時間：
2025-03-18
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?實背景
IBD研究與治療的迫切需求
炎癥性腸病（IBD）包括克羅恩病（CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（UC），全球患者超千萬，病程遷延反復(fù)，10%患者最終進(jìn)展為結(jié)腸癌。傳統(tǒng)藥物存在應(yīng)答率低、副作用顯著等問題，亟需更貼近臨床病理特征的動物模型推動新藥研發(fā)。
一、DSS誘導(dǎo)的IBD模型原理：靶向腸道屏障損傷與免疫失衡
1、基于IBD核心病理機(jī)制：
屏障破壞：炎癥導(dǎo)致腸道上皮緊密連接蛋白降解
免疫失調(diào)：促炎因子（如TNF-α、IL-6）異常升高
菌群紊亂：致病菌易位激活固有免疫
2、實驗材料體系
標(biāo)準(zhǔn)化造模流程
Step 1：DSS誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎
?自由飲用3% DSS溶液，持續(xù)7天；D8-D16給H4肽干預(yù)，D17取材。
?建立典型癥狀：腹瀉（第3天）、便血（第5天）
Step 2：模型評估
? 宏觀指標(biāo)：結(jié)腸長度測量、疾病活動指數(shù)（DAI）評分
? 微觀評估
病理切片：隱窩結(jié)構(gòu)破壞程度分級
免疫組化：ZO-1/Occludin蛋白表達(dá)檢測
造 模 結(jié) 果
在DSS模型中，吉妮歐技術(shù)體系顯示：
? 表型模擬成功：
• 實驗組小鼠出現(xiàn)典型體重下降（15%-20%）、血便、結(jié)腸縮短
• 病理顯示隱窩結(jié)構(gòu)破壞、炎性細(xì)胞浸潤
? 干預(yù)效果顯著：
• H4肽治療組結(jié)腸黏膜完整性恢復(fù)
• 緊密連接蛋白表達(dá)量提升2-3倍
• 炎性細(xì)胞浸潤減少50%以上
結(jié)論與價值
01、成功構(gòu)建DSS誘導(dǎo)型IBD模型，重現(xiàn)人類疾病核心特征
02、為IBD機(jī)制研究及藥物篩選提供標(biāo)準(zhǔn)化平臺
二、TNBS誘導(dǎo)的IBD模型原理：乙醇破壞黏膜，激活免疫反應(yīng)，引發(fā)透壁性炎癥。
Step 1：動物準(zhǔn)備
?選用6-8周齡雄性大鼠/小鼠（200-300g）
?提前1周適應(yīng)環(huán)境，實驗前禁食12-24小時
Step 2：造模操作
?每天固定10：00與18：00進(jìn)行灌胃給藥，每天兩次，給藥前1h禁食，持續(xù)31天
?給藥方案：
于D3、D10、D17、D24天采用45%無水乙醇聯(lián)合TNBS（劑量階梯遞增至50mg/kg）灌腸造模。
Step 3：后續(xù)處理
?恢復(fù)自由飲食，觀察動物狀態(tài)
?按實驗設(shè)計進(jìn)行藥物干預(yù)
Step 4：結(jié)果驗證
? 生存率：生存情況，評估模型的嚴(yán)重程度
? 病理檢測：腸道HE染色觀察炎癥
? 生化指標(biāo)：檢測TNF-α、IL-6等炎癥因子
三、T細(xì)胞誘導(dǎo)的腸炎模型原理：CD4+CD45RBhigh T細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠后，因缺乏調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而過度活化，引發(fā)腸道炎癥。
Step 1：準(zhǔn)備階段
?供體鼠：C57BL/6小鼠，提取脾臟的CD4+CD45RBhigh T細(xì)胞。
?受體鼠：RAG2 KO小鼠（缺乏T/B細(xì)胞）
?細(xì)胞純化：磁珠分選確保高純度CD4+CD45RBhigh T細(xì)胞。
Step 2：造模操作
?細(xì)胞轉(zhuǎn)移：向受體鼠尾靜脈輸注1×10?個CD4+CD45RBhigh T細(xì)胞。
?炎癥誘導(dǎo)：接觸腸道抗原后被激活形成結(jié)腸炎性T細(xì)胞，分泌細(xì)胞因子，導(dǎo)致腸道嚴(yán)重炎癥發(fā)生。
Step 3：結(jié)果驗證
? 體重監(jiān)測：記錄每周體重情況。
? 糞便分析：觀察糞便形態(tài)變化。
? 病理檢測：HE染色評估腸炎損傷。
吉妮歐生物技術(shù)優(yōu)勢
1、精準(zhǔn)模型構(gòu)建
• 多模型選擇：DSS急性/慢性模型、TNBS化學(xué)誘導(dǎo)模型、T細(xì)胞誘導(dǎo)模型、IL-10基因缺陷自發(fā)模型
• 表型標(biāo)準(zhǔn)化：建立DAI評分、組織病理分級等量化標(biāo)準(zhǔn)
2、多維評價體系
• 菌群-免疫互作分析（16S rRNA測序+流式細(xì)胞術(shù)）
3、全流程服務(wù)
• 從模型定制、藥效評價到機(jī)制研究的完整解決方案
TNBS、DSS和T細(xì)胞三種不同方式
誘導(dǎo)的IBD模型該如何選擇？
具體選擇策略
研究急性炎癥或藥物篩選 → DSS模型
（快速、低成本）
研究克羅恩病樣透壁炎癥 → TNBS模型
（需注意品系敏感性）
探索T細(xì)胞或微生物調(diào)控機(jī)制 → T細(xì)胞轉(zhuǎn)移模型
（需免疫缺陷鼠支持）
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