吉妮歐提供ELISPOT分析檢測服務助力疫苗研發(fā)

發(fā)布時間：

2024-12-23

來源：

吉妮歐

作者：

小吉

閱讀數(shù)：

2635

ELIspot（酶聯(lián)免疫斑點檢測）是一種基于單細胞功能分析的生物檢測技術，通過將活細胞接種于抗體包被的PVDF膜表面，利用固相抗體捕獲分泌性細胞因子，經(jīng)酶標二抗與顯色底物反應后，在分泌位點形成可視化斑點。該技術兼具ELISA的高靈敏度與細胞培養(yǎng)的動態(tài)監(jiān)測優(yōu)勢，可在單細胞分辨率水平定量分析淋巴細胞分泌IFN-γ、IL-4等特異性細胞因子的功能活性，廣泛應用于疫苗效力評估、腫瘤免疫監(jiān)測及自身免疫疾病研究領域。

ELIspot（酶聯(lián)免疫斑點檢測）是一種結合細胞培養(yǎng)技術與酶聯(lián)免疫吸附技術（ELISA）的實驗方法，用于檢測單個細胞分泌的細胞因子。該技術使用涂有特定抗體的膜來捕獲細胞因子，通過酶聯(lián)斑點顯色的方式展示結果。

ELISpot 實驗原理圖來源于Janetzki S, Price L, Schroeder H, Britten CM, Welters MJ, Hoos A. Guidelines for the automated evaluation of Elispot assays. Nat Protoc. 2015 Jul;10(7):1098-115. doi: 10.1038/nprot.2015.068. Epub 2015 Jun 25. PMID: 26110715.

ELIspot 實驗大致流程

1. 膜準備

使用PVDF膜為底的96孔板，包被特定的單克隆抗體。

2. 細胞培養(yǎng)

• 向孔內添加待檢測的細胞和抗原刺激物進行培養(yǎng)。
• 在刺激下，細胞會分泌相應的細胞因子，這些因子被膜上的抗體所捕獲。

3. 洗滌與檢測

• 洗去細胞后，被捕獲的細胞因子與生物素標記的第二抗體結合。
• 使用酶標記的親和素與生物素結合，進行化學酶聯(lián)顯色，形成圓形斑點。

4. 數(shù)據(jù)分析

統(tǒng)計膜上斑點的數(shù)量，并將其除以初始細胞的總數(shù)，以計算陽性細胞的百分比。