胃癌三種細胞株傳代、細胞并存及細胞復蘇知識步驟分享
發布時間：
2022-01-17
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以下是人胃癌細胞三種細胞株MGC-803,BGC-823以及SGC-7901的培養，具體方法步驟如下：
1）細胞傳代：
A將復蘇長滿細胞的培養瓶中培養基吸出,加3ml 0.86%生理鹽水洗滌兩次,棄去洗滌液,加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml,消化液均勻覆蓋細胞表面,消化時間約1-3分鐘。
B消化后在倒置顯微鏡下可見細胞皺縮變圓,邊緣折光性增強,在細胞尚未脫落時倒掉消化液,立即加入血清或含血清的培養基,終止消化。
C 用吸管將培養瓶壁上的細胞吹打下來, 1000 rpm/分鐘，離心5分鐘,棄去培養基,加入含10%FBS的RPMI-1640培養液6ml,吹打混勻, 視細胞密度以1:2或1:3分瓶培養,當細胞長滿培養瓶且形成致密單層時即可再傳代。
2） 細胞凍存：
A取在培養瓶內已經生長2－3天形成單層的細胞，最好在凍存前一天換液，以保證細胞處于良好的營養狀態。
B 用胰蛋白酶消化細胞，計數，1000 rpm/分鐘，離心10分鐘。
C 棄去上清，用配好的凍存培養基重新懸浮細胞并配成濃度為106 細胞/ ml的細胞懸液。
D 用吸管輕輕吹打使細胞均勻，按1 ml的量分裝入無菌凍存管內。
E 然后將標記好的凍存管放入－20℃，2小時后放入－80℃過夜，次日放入液氮中。
3） 細胞復蘇：
A從液氮罐中取出一凍存管的細胞,迅速放入37℃水中,使之基本融化,那入超凈臺,吸出細胞放入5ml含10%FBS的RPMI-1640培養液的離心管,1000 rpm/分鐘，離心5分鐘。
B棄去培養基,加入含10%FBS的RPMI-1640培養液6ml,吹打混勻,分裝成兩瓶,放入在37℃、5% CO2,飽和濕度的培養箱中培養。
C 24小時更換培養基一次,待細胞融合時用0.25%胰蛋白酶消化傳代,取3-4代的細胞實驗用
以上細胞都是貼壁細胞
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