293T人胚腎細(xì)胞起死回生之心得學(xué)會(huì)你在培養(yǎng)中將少走很多彎路

發(fā)布時(shí)間：

2022-01-24

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當(dāng)細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)長滿達(dá)到80％時(shí)就要傳代，一傳二，24小時(shí)后再傳代。48小時(shí)傳就不好了，如果在24小時(shí)后細(xì)胞沒有長到80％，應(yīng)該換新的培養(yǎng)基，不然，培養(yǎng)基變黃，細(xì)胞脫落

　　293T細(xì)胞起死回生之方法，詳細(xì)講解一下要點(diǎn)，分享一點(diǎn)心得，希望有用的上的少走一些彎路。
　　細(xì)胞傳代：
　　當(dāng)細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)長滿達(dá)到80％時(shí)就要傳代，一傳二，24小時(shí)后再傳代。48小時(shí)傳就不好了，如果在24小時(shí)后細(xì)胞沒有長到80％，應(yīng)該換新的培養(yǎng)基，不然，培養(yǎng)基變黃，細(xì)胞脫落。
　　細(xì)胞消化：
　　將細(xì)胞培養(yǎng)瓶豎立放置，吸走培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基中的脫落細(xì)胞較多，說明細(xì)胞現(xiàn)在很容易脫落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，來回輕微晃動(dòng)培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞完全脫落，加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清），混勻，不能吹打，分裝2瓶，如果細(xì)胞沒長滿就脫落，則只需加入5mlMEM，不分裝。如果培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞貼壁較牢固，培養(yǎng)基上清沒有細(xì)胞脫落碎片，且細(xì)胞長滿達(dá)到80％以上，吸走培養(yǎng)基，加入5ml的PBS+EDTA(0.02%)，迅速輕微晃動(dòng)，豎立培養(yǎng)瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超過3min，細(xì)胞完全消化脫壁，取出加入10ml培養(yǎng)基輕微吸打混勻，分裝2瓶。
　　培養(yǎng)基：
　　MEM(GIBCO)+10%胎牛血清（杭州四季青）＋雙抗