293T人胚腎細胞起死回生之心得學會你在培養中將少走很多彎路

發布時間：

2022-01-24

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當細胞在細胞培養瓶內長滿達到80％時就要傳代，一傳二，24小時后再傳代。48小時傳就不好了，如果在24小時后細胞沒有長到80％，應該換新的培養基，不然，培養基變黃，細胞脫落

　　293T細胞起死回生之方法，詳細講解一下要點，分享一點心得，希望有用的上的少走一些彎路。
　　細胞傳代：
　　當細胞在細胞培養瓶內長滿達到80％時就要傳代，一傳二，24小時后再傳代。48小時傳就不好了，如果在24小時后細胞沒有長到80％，應該換新的培養基，不然，培養基變黃，細胞脫落。
　　細胞消化：
　　將細胞培養瓶豎立放置，吸走培養基，如果培養基中的脫落細胞較多，說明細胞現在很容易脫落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，來回輕微晃動培養瓶直到細胞完全脫落，加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清），混勻，不能吹打，分裝2瓶，如果細胞沒長滿就脫落，則只需加入5mlMEM，不分裝。如果培養瓶中的細胞貼壁較牢固，培養基上清沒有細胞脫落碎片，且細胞長滿達到80％以上，吸走培養基，加入5ml的PBS+EDTA(0.02%)，迅速輕微晃動，豎立培養瓶，吸走，加入1ml0.05%胰酶，37度消化不超過3min，細胞完全消化脫壁，取出加入10ml培養基輕微吸打混勻，分裝2瓶。
　　培養基：
　　MEM(GIBCO)+10%胎牛血清（杭州四季青）＋雙抗