HBV乙肝新小鼠模型1.1X 久顯著地降低小鼠肝臟乙肝表面抗原和核心抗原水平
發(fā)布時間：
2022-02-24
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乙肝病毒只能自然感染人類和黑猩猩，由于缺乏合適的小動物實驗，導致更為有效的HBV新療法開發(fā)受限。美國德克薩斯兒童醫(yī)院、休斯頓衛(wèi)理公會醫(yī)院等研究人員介紹，開發(fā)了新的HBV轉基因小鼠模型可以模擬慢性HBV感染，永久顯著地降低小鼠肝臟乙肝表面抗原和核心抗原水平。
乙肝新HBV小鼠模型1.1X，美國科學家設計，永久顯著降低表面抗原
從前沿科學角度，已有科學家開發(fā)出包含一個完整的超長1.3mer構建的HBV轉基因小鼠模型。但是，該模型缺乏共價閉合環(huán)狀DNA（cccDNA），即乙肝病毒的外體轉錄模板，并且由于乙肝病毒整合在每個細胞中，導致HBV無法治愈。已有模型中，主要將HBV基因組整合到小鼠染色體，但這種模型并無法治愈HBV小鼠。
研究人員介紹，研究人員開發(fā)了一種新的轉基因小鼠模型，允許乙肝病毒從小鼠染色體中切除，形成一個重組環(huán)狀DNA分子，類似于天然的環(huán)狀乙肝病毒基因組。在這些小鼠中，乙肝病毒表達實現了降低，在這個新小鼠模型中使功能性治愈成為可能。吉妮歐介紹一下，美國研究人員的制備方法與科學性：前面提到，動物模型研究困難需要解決2個問題，一個是cccDNA，一個則是HBV整合細胞。
研究人員制作了一個新的轉基因小鼠（命名為：HBV1.1X），它使用了Cre/LoxP技術生成一個可以切除的循環(huán)HBV基因組。模型具有敲入ROSA26基因座的HBV1.1-mer盒式表達，被設計用來從出生開始穩(wěn)定表達病毒蛋白，這就像目前的HBV轉基因小鼠模型，在基因組切除和引入Cre重組酶之前完成。研究人員的目標是設計一個小鼠模型，HBV蛋白可以從一個整合的基因組中表達，然后，在這個整合的HBV基因組中可以被切除并形成rcccDNA。
切除的rcccDNA不會擴增，因為在小鼠中缺乏cccDNA的形成，伴隨時間推移可以導致肝細胞有絲分裂的緩慢丟失。為了實現以上這些目標，研究人員試圖模擬目前使用的HBV超長1.3 mer基因組，旨在促進所有的病毒蛋白生產。該超長區(qū)域復制了部分HBV x蛋白（HBx）的ORF，因此，在HBx蛋白中尋找可以耐受的處理位置。
研究人員選擇了一個肽插入策略，來避免刪除對HBx功能至關重要的蛋白質結構域，因為在LoxP位點額外發(fā)現的12個氨基酸，只會在蛋白質中形成一個額外的環(huán)或連接體，而不會引起干擾產生。HBx中轉錄反式激活所需的兩個蛋白基序之間的區(qū)域，但在聚合酶編碼序列結束后和增強子II區(qū)域開始前，研究人員找到了一個合適的靶點。
結果表明，通過病毒或轉基因Cre在HBV1.1X小鼠中，可以表達誘導重組cccDNA（rcccDNA）的形成，并在小鼠中通過Cre調節(jié)乙肝表面抗原（HBsAg）和核心抗原（HBc）表達。誘導的Cre，能夠顯著下調HBV整體基因組的HBsAg基線水平。為了證明從HBV1.1X小鼠中清除HBV，研究人員給藥表達Cre的腺病毒，通過rcccDNA切除和隨后的免疫應答觀察到，永久性地顯著降低了小鼠肝臟中的乙肝表面抗原與乙肝核心抗原水平。
綜上所述，美國研究人員結論：研究人員設計的HBV1.1X模型是首個可調節(jié)creo的HBV轉基因小鼠模型，具有模擬慢性HBV感染價值，具有新生兒對HBV抗原的表達和耐受性，可按需來調節(jié)HBV表達。簡單的講，吉妮歐對美國科學家開發(fā)設計的這項新動物模型做一個解釋：以往科學界已經開發(fā)出了HBV轉基因小鼠模型，但這些模型還無法解決cccDNA或整合細胞，這項研究設計的是一個新轉基因小鼠模型；
它能夠允許HBV從小鼠染色體中切除。乙肝病毒的整合特性，阻止了以往模型治愈HBV，所以，研究人員設計了這種新轉基因小鼠和HBV基因組切除方法。這種方法名為Cre/LoxP技術，它可以有效地將整合的HBVDNA轉化為類似HBV cccDNA的重組環(huán)狀基因組。再將腺病毒（Ad-Cre）注射到研究人員的HBV轉基因小鼠中，發(fā)現可以消除HBV蛋白產生，并且誘導小鼠免疫應答。
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