沉默對脂多糖誘導的類風濕關節炎滑膜成纖維細胞增殖、凋亡的影響

發布時間：

2022-03-14

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觀察脂聯素受體1（adiponectin receptor1,AdipoR1）沉默對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導的人類風濕關節炎滑膜成纖維細胞增殖、凋亡的影響

　　目的 :
　　觀察脂聯素受體1（adiponectin receptor1,AdipoR1）沉默對脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）誘導的人類風濕關節炎滑膜成纖維細胞增殖、凋亡的影響。（推薦閱讀：類風濕關節炎滑膜成纖維細胞）
　　方法:
　　（1）利用免疫熒光、Western blot鑒定并驗證shRNA技術對構建的AdipoR1沉默（sh-AdipoR1組）細胞的干擾效率;
　　（2）分別用CCK8試劑盒、流式細胞儀檢測LPS（100 ng/m L）對sh-AdipoR1組及空載病毒對照（sh-NC組）細胞增殖及凋亡的影響;
　　（3）利用實時定量聚合酶鏈反應法（real-time polymerase chain reaction,realtime PCR）檢測LPS對sh-AdipoR1及sh-NC組細胞中凋亡相關基因BCL-2、BCL-XL、BAX、BAK表達的影響。同時設置無LPS刺激的sh-NC、sh-AdipoR1組作為對照。
　　結果:
　　（1）熒光顯微鏡下可見sh-AdipoR1組細胞熒光蛋白表達效率趨近于100%,Western blot檢測結果顯示:與sh-NC組相比,sh-AdipoR1組AdipoR1蛋白的表達顯著下降（P<0.05）,表明AdipoR1沉默的細胞構建成功;
　　（2）無LPS刺激情況下,sh-NC組與sh-AdipoR1組細胞增殖速率及凋亡細胞比例無明顯差異;LPS刺激可顯著增加sh-NC組和sh-AdipoR1組細胞相對增殖速率及凋亡細胞比例（P<0.05）;在LPS作用24、48 h,sh-AdipoR1組細胞增殖速率均顯著低于sh-NC組（P<0.05）,而sh-AdipoR1組細胞凋亡率顯著高于sh-NC組（P<0.05）;
　　（3）real-time PCR結果顯示,無LPS刺激情況下,sh-NC組與sh-AdipoR1組抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL與促進凋亡基因BAK、BAX的相對表達量均無顯著差異（P>0.05）;LPS刺激可降低抑凋亡基因BCL-2、BCL-XL表達,增加促凋亡基因BAX、BAK表達（P<0.05）;在LPS誘導下與sh-NC組相比,sh-AdipoR1組抑制凋亡基因BCL-2、BCL-XL表達下降,促凋亡基因BAX、BAK表達顯著升高（P<0.05）。
　　結論:
　　AdipoR1基因的沉默可抑制LPS誘導的細胞增殖,促進細胞凋亡,并提示AdipoR1相關信號通路可能在類風濕關節炎發生發展中起到重要作用,阻斷該途徑可有效阻斷LPS誘導的細胞炎癥反應。
　　關鍵詞：脂聯素受體1; 類風濕關節炎; 滑膜成纖維細胞; 細胞增殖; 細胞凋亡;