大黃素可通過抑制NF-B信號通路活化抑制類風濕關節炎滑膜細胞增殖和炎癥反應

發布時間：

2022-03-23

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大黃素可能通過抑制 NF-B信號通路的活化抑制HFLS-RA 類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞增殖和炎癥反應。

　　目的
　　探討大黃素對TNF-α誘導的HFLS-RA人類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞增殖的影響。方法將人類風濕關節炎成纖維樣滑膜 HFLSRA 細胞隨機分為對照組（未處理）、誘導組（TNF-α處理）、25 μmol/L 大黃素組（TNF-α和大黃素處理）、50 μmol/L大黃素組（TNF-α和大黃素處理）和100 μmol/L大黃素組（TNF-α和大黃素處理）。采用 MTT法和克隆形成實驗檢測細胞的存活率和克隆形成率，流式細胞儀檢測細胞的凋亡率，RT-PCR 檢測凋亡相關基因 Bcl-2 和 Bax mRNA的表達，ELISA 檢測細胞上清液中IL-6和IL-β 水平，Western blot 檢測細胞中 NF-B信號通路相關蛋白 p-HkBα和 p-NF水B p65的表達。
　　結果
　　1.大黃素對 HFLS-RA 類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞增殖的影響 MT檢測結果顯示，與對照組比較，誘導組細胞的存活率升高（P<0.05）;與誘導組比較，25、50、100 wmol/L 大黃素處理組細胞的存活率下降（P<0.05）。同時，克隆形成實驗結果顯示，誘導組細胞的克隆形成率較對照組升高（P<0.05）;而給予25、50、100 μmol/L大黃素處理后，HFLS-RA細胞的克隆形成率較誘導組均降低（P<0.05）。隨著大黃素濃度的增加，HFLS-RA細胞的存活率和克隆形成率越低。見表1。

　　2.大黃素對HFIS-RA 細胞凋亡的影響流式細胞儀（圖 2）檢測對照組、誘導組、25 μmol/L 大黃素組、50 μmol/L大黃素組和 100 μmol/L大黃素組細胞的凋亡率存在差異（P<0.05），與對照組比較，誘導組細胞的凋亡率降低（P<0.05）;與誘導組比較，25、50、100 μmol/L 大黃素組細胞的凋亡率均升高（P<0.05），且呈濃度依賴性。結果見圖1、表1。

　　3.大黃素對HFLS-RA 類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞凋亡相關基因表達的影響RTPCR 檢測結果顯示，誘導組細胞中 Bcl-2 mRNA 的表達水平高于對照組（P<0.05），而 Bax mRNA 表達低于對照組（P<0.05）;隨25、50、100 μmol/L大黃素濃度的升高，HFLS-RA 細胞中 Bcl-2 mRNA逐漸降低，而Bax mRNA表達逐漸升高，與誘導組比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。見表2。

　　3.4 大黃素對HFLS-RA細胞上清液中I-6和I-1β水平的影響與對照組比較，誘導組中 IL-6和Ⅱ-1β 水平升高（（P<0.05）;而大黃素組較誘導組降低（P<0.05），且大黃素濃度越高降低幅度越明顯。見表3。

　　5.大黃素對HFLS-RA 類風濕關節炎成纖維樣滑膜細胞中 NF-B信號通路的影響與對照組比較，誘導組細胞中 p-kBα 和 p-NF-B p65蛋白的表達升高（P<0.05）;與誘導組比較，25、50、100 μmol/L大黃素組細胞中 p-kBα和 p-NF+B p65 蛋白的表達下降（P<0.05），且呈濃度依賴性。見圖2、表4。