溫針灸對兔膝骨關節炎模型表達的影響明確溫針灸抑制軟骨細胞過度凋亡的途徑

發布時間：

2022-06-30

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實驗基于PI3K/Akt 信號通路，觀察溫針灸對兔膝骨關節炎模型 PI3K、Akt、Bcl-2、Bax 的表達的影響，明確溫針灸抑制軟骨細胞過度凋亡的途徑

　　摘要
　　膝骨關節炎是由各種原因導致軟骨細胞過度凋亡使正常軟骨細胞數量減少、關節軟骨自我修復受損，造成關節軟骨損傷的一種退行性骨關節病。（推薦閱讀：膠原誘導關節炎(CIA)嚙齒動物模型、類風濕性關節炎(RA)模型、膠原誘導關節炎（CIA）嚙齒動物模型、骨關節炎模型）
　　在正常穩態下，軟骨細胞的增殖和凋亡處于平衡狀態，起到維持軟骨結構與功能穩定的作用。當軟骨細胞過度凋亡時，內環境穩態被打破，軟骨損傷加劇，導致膝骨關節炎的加速發展。
　　研究表明溫針灸治療膝骨關節炎的療效確切，可改善軟骨細胞凋亡狀態4，但其作用途徑不明確。P13K/Akt 信號通路對調控細胞凋亡發揮著重要作用5，該信號通路的激活及其下游因子Bcl-2、Bax表達的變化是影響軟骨細胞凋亡的關鍵問。
　　因此，此次實驗基于PI3K/Akt 信號通路，觀察溫針灸對兔膝骨關節炎模型 PI3K、Akt、Bcl-2、Bax 的表達的影響，明確溫針灸抑制軟骨細胞過度凋亡的途徑。
　　背景
　　溫針灸臨床治療膝骨關節炎療效顯著，但基礎治療機制尚未明確。
　　目的
　　觀察溫針灸對兔膝骨關節炎動物模型關節軟骨中PI3K/Akt信號通路及其下游因子Bcl-2、Bax表達的影響。
　　方法
　　取6月齡新西蘭兔40只，采用隨機數字表法分為正常組、模型組、藥物組、溫針灸組，每組10只。模型組、藥物組、溫針灸組兔右后肢膝關節伸直位以石膏管型固定4周，制備膝骨關節炎模型。造模成功后，模型組每日置于兔架上固定15 min，藥物組每天行硫酸氨基葡萄糖灌胃治療（77mg/kg，1次/d），溫針灸組每天行溫針灸治療（15 min/次，1次/d）。連續治療28 d后，利用蘇木精-伊紅染色觀察軟骨損傷程度，Tunel法檢測軟骨細胞凋亡，RT-PCR法檢測軟骨組織中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表達，Western blot法檢測軟骨組織中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的蛋白表達。
　　結果
　　①蘇木精-伊紅染色顯示，模型組軟骨細胞數量減少，細胞排列無序，層次紊亂，軟骨面被破壞，Mankin評分顯著升高;藥物組與溫針灸組軟骨細胞數量明顯增多，基質著色深，Mankin評分降低
　　②與正常組相比，模型組軟骨細胞凋亡率增高（P<0.05）; 與模型組相比，藥物組、溫針灸組軟骨細胞凋亡率降低（P< 0.05）
　　③RT-PCR與Western blot檢測顯示，與正常組相比，模型組PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA與蛋白表達降低（P<0.05），Bax的mRNA與蛋白表達升高（P<0.05）∶與模型組相比，溫針灸組與藥物組PI3K、Akt、Bd-2的mRNA與蛋白表達升高（P<0.05），Bax的mRNA與蛋白降低（P<0.05）
　　④結果表明溫針灸可通過調控PI3K/Akt信號通路引起下游因子Bc-2表達升高、Bax表達降低，進而抑制軟骨細胞過度凋亡，達到保護關節軟骨的作用。
　　關鍵詞∶膝骨關節炎;溫針灸;軟骨細胞凋亡;PI3K/Akt信號通路;下游因子