臨床前CRO藥效學(xué)評價續(xù)斷離子液體提取物質(zhì)量

發(fā)布時間：

2022-07-04

來源：

專業(yè)提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB細(xì)胞庫源細(xì)胞、動物實驗、CRO服務(wù)、SCI潤色)

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續(xù)斷離子液體提取物的質(zhì)量優(yōu)于續(xù)斷壯骨膠囊，具有促進成骨細(xì)胞 MC3T3-E1生長和抑制破骨細(xì)胞 RAW264.7活性的雙向作用

　　摘要
　　歷代本草將續(xù)斷列為強筋骨、續(xù)折傷良藥，其有效成分續(xù)斷皂苷可誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）向成骨細(xì)胞分化和礦化，促進骨形成蛋白 2（BMP-2）表達(dá)的同時，明顯增高其下游關(guān)鍵磷酸化蛋白 SMAD1/5/8，P38，ERK1/2的表達(dá)量21，還可明顯上調(diào)成骨細(xì)胞護骨因子（OPG）/核因子-kB（NF-kB）受體激活蛋白配體（RANKL）的表達(dá)，通過調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的分泌因子而調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的活化131，廣泛用于治療骨質(zhì)疏松癥。（推薦閱讀：臨床前CRO服務(wù)）
　　續(xù)斷提取工藝的不同會影響提取物的質(zhì)量和藥效，本研究中采用高氯酸顯色法、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）法和體外釋放法測定，評價了續(xù)斷離子液體提取物與上市對照藥材間的質(zhì)量差異;通過 MC3T3-EI細(xì)胞生長和堿性磷酸酶（ALP）活力測定，評價了續(xù)斷離子液體提取物對成骨細(xì)胞的作用;通過測定對破骨細(xì)胞 RAW264.7生長和抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）活力的抑制作用，評價了續(xù)斷離子液體提取物對破骨細(xì)胞的影響。
　　目的
　　建立續(xù)斷離子液體提取物質(zhì)量和藥效學(xué)評價方法。
　　方法
　　采用紫外分光光度法測定續(xù)斷離子液體提取物和續(xù)斷壯骨膠囊中總皂苷的含量，采用槳法測定川續(xù)斷皂苷Ⅵ的溶出率，采用液相色譜-質(zhì)譜法測定各成分的含量。以二甲基亞砜為空白對照，通過成骨細(xì)胞 MC3T3-E1及破骨細(xì)胞RAW264.7生長影響，MC3T3-E1細(xì)胞堿性磷酸酶（（ALP）活性影響、RAW264.7細(xì)胞抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）活力影響等體外細(xì)胞試驗，評價1.65～200.00 μg/mL續(xù)斷離子液體提取物的藥效。
　　結(jié)果
　　續(xù)斷離子液體提取物中總皂苷含量和川續(xù)斷皂苷Ⅵ溶出率分別為86.01%和77.83%，均高于續(xù)斷壯骨膠囊的78.74%和25.61%。與空白對照組比較，質(zhì)量濃度為6.25~100.00μg/mL的續(xù)斷離子液體提取物可顯著促進 MC3T3-E1細(xì)胞的生長，質(zhì)量濃度為12.50~200.00μg/mL的續(xù)斷離子液體提取物可顯著抑制RAW264.7細(xì)胞的生長和 StrACP酶活力的表達(dá)（P<0.05），且呈濃度依賴關(guān)系;質(zhì)量濃度為6.25~200.00μ/mL 的離子液體提取物雖可提高 MC3T3-E1細(xì)胞ALP的活性，但差異不顯著（P>0.05）。
　　結(jié)論
　　續(xù)斷離子液體提取物的質(zhì)量優(yōu)于續(xù)斷壯骨膠囊，具有促進成骨細(xì)胞 MC3T3-E1生長和抑制破骨細(xì)胞 RAW264.7活性的雙向作用。
　　關(guān)鍵詞
　　續(xù)斷;離子液體提取物;成骨細(xì)胞;破骨細(xì)胞;體外細(xì)胞試驗;質(zhì)量評價;藥效學(xué)評價