臨床前CRO藥效學評價 續斷離子液體提取物質量
發布時間：
2022-07-04
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摘要
歷代本草將續斷列為強筋骨、續折傷良藥，其有效成分續斷皂苷可誘導大鼠骨髓間充質干細胞（BMSC）向成骨細胞分化和礦化，促進骨形成蛋白 2（BMP-2）表達的同時，明顯增高其下游關鍵磷酸化蛋白 SMAD1/5/8，P38，ERK1/2的表達量21，還可明顯上調成骨細胞護骨因子（OPG）/核因子-kB（NF-kB）受體激活蛋白配體（RANKL）的表達，通過調節成骨細胞的分泌因子而調節破骨細胞的活化131，廣泛用于治療骨質疏松癥。（推薦閱讀：臨床前CRO服務）
續斷提取工藝的不同會影響提取物的質量和藥效，本研究中采用高氯酸顯色法、液相色譜-質譜（LC-MS）法和體外釋放法測定，評價了續斷離子液體提取物與上市對照藥材間的質量差異;通過 MC3T3-EI細胞生長和堿性磷酸酶（ALP）活力測定，評價了續斷離子液體提取物對成骨細胞的作用;通過測定對破骨細胞 RAW264.7生長和抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）活力的抑制作用，評價了續斷離子液體提取物對破骨細胞的影響。
目的
建立續斷離子液體提取物質量和藥效學評價方法。
方法
采用紫外分光光度法測定續斷離子液體提取物和續斷壯骨膠囊中總皂苷的含量，采用槳法測定川續斷皂苷Ⅵ的溶出率，采用液相色譜-質譜法測定各成分的含量。以二甲基亞砜為空白對照，通過成骨細胞 MC3T3-E1及破骨細胞RAW264.7生長影響，MC3T3-E1細胞堿性磷酸酶（（ALP）活性影響、RAW264.7細胞抗酒石酸酸性磷酸酶（StrACP）活力影響等體外細胞試驗，評價1.65～200.00 μg/mL續斷離子液體提取物的藥效。
結果
續斷離子液體提取物中總皂苷含量和川續斷皂苷Ⅵ溶出率分別為86.01%和77.83%，均高于續斷壯骨膠囊的78.74%和25.61%。與空白對照組比較，質量濃度為6.25~100.00μg/mL的續斷離子液體提取物可顯著促進 MC3T3-E1細胞的生長，質量濃度為12.50~200.00μg/mL的續斷離子液體提取物可顯著抑制RAW264.7細胞的生長和 StrACP酶活力的表達（P<0.05），且呈濃度依賴關系;質量濃度為6.25~200.00μ/mL 的離子液體提取物雖可提高 MC3T3-E1細胞ALP的活性，但差異不顯著（P>0.05）。
結論
續斷離子液體提取物的質量優于續斷壯骨膠囊，具有促進成骨細胞 MC3T3-E1生長和抑制破骨細胞 RAW264.7活性的雙向作用。
關鍵詞
續斷;離子液體提取物;成骨細胞;破骨細胞;體外細胞試驗;質量評價;藥效學評價
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