雙酚A BPA誘發(fā)大鼠卵巢儲備功能下降DOR動物模型的最佳制備方案并明確其中醫(yī)證候屬性

發(fā)布時間：

2022-08-17

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專業(yè)提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB細胞庫源細胞、動物實驗、CRO服務、SCI潤色)

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DOR可導致育齡婦女過早出現(xiàn)月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)并伴隨不孕，降低輔助生殖技術的成功率，盡早干預會避免其繼續(xù)發(fā)展成卵巢早衰"1。臨床實踐表明，中醫(yī)藥治療DOR具有很好的臨床療效*2，但探討DOR的病因病機和中醫(yī)藥作用機制需要動物模型的支持。

　　摘要
　　卵巢儲備功能下降（DOR）是指卵巢內(nèi)存留的可募集的卵泡數(shù)量和（或）卵母細胞質量下降，臨床表現(xiàn)以月經(jīng)異常、不孕癥和圍絕經(jīng)期類不適為主。該病發(fā)病率逐年升高，且有低齡化發(fā)展趨勢21，若不及早進行有效干預，可在1~5年發(fā)展為卵巢早衰31，是婦科領域研究的熱點和難點之一。
　　雙酚A（BPA）是當前環(huán)境普遍存在的環(huán)境污染物L，現(xiàn)有研究證實其對卵巢功能有不利影響【。2018年5月—2021年12月，本團隊擬在此基礎上構建一種新的DOR病證結合動物模型并分析其證候屬性，以期為進一步挖掘中醫(yī)藥對抗環(huán)境污染、保護女性生育力提供依據(jù)。
　　目的
　　探討雙酚A（BPA）誘發(fā)大鼠卵巢儲備功能下降（DOR）動物模型的最佳制備方案，并明確其中醫(yī)證候屬性。
　　方法
　　選擇動情周期規(guī)律的3、6月齡雌性清潔SD大鼠各18只，不同月齡分別按隨機數(shù)字表法分為低、中、高劑量組。低、中、高劑量組每日分別給予50、100、200my/kg BPA混懸液灌胃，均每日灌胃1次，至大鼠動情周期紊亂。觀察大鼠一般情況；陰道涂片觀察大鼠動情周期；取大鼠腹主動脈血，分離血清，用ELISA法檢測血清促卵泡生成素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E，）、抗苗勒氏管激素（AMH）、抑制素-B（INHB）；取雙側卵巢組織形態(tài)，測算各級卵泡比例、卵巢指數(shù)。選擇觀察指標變化最明顯組所用的模型制備方法為最佳方法。將造模成功的18只大鼠按照隨機數(shù)字表法分為對照組、右歸丸組、養(yǎng)精種玉湯組，每組6只，分別給予蒸餾水、治療腎陽虛的右歸丸、治療腎陰虛的養(yǎng)精種玉湯按ImL/100g體質量灌胃，連續(xù)2周。對比各組動情周期變化，腎陽虛癥狀，卵巢組織形態(tài)、卵巢指數(shù)、各級卵泡比例，血清激素、INHB、AMH水平。
　　結果
　　3、6月齡各BPA干預組大鼠活動減少，喜蜷臥扎堆。3月齡中劑量BPA組動情周期紊亂時間較其他組短；AMH水平最低，原始卵泡最少，閉鎖卵泡最多，因此3月齡中劑量BPA組的模型制備方法最佳。模型組大鼠實驗期間持續(xù)處于動情周期紊亂狀態(tài)，養(yǎng)精種玉湯組大鼠有1 只恢復規(guī)律動情周期，右歸丸組有5只大鼠恢復規(guī)律動情周期。右歸丸組大鼠規(guī)律動情周期恢復數(shù)量（5只）高于對照組（無）、養(yǎng)精種玉湯組（1只），腎陽虛癥狀明顯改善。模型組大鼠卵巢蒼白，體積變小，質硬右歸丸組大鼠卵巢顏色紅潤，體積變大，組織彈性好，表面有多個生長卵泡養(yǎng)精種玉湯組大鼠卵巢表面生長卵泡少，組織彈性差。與對照組、養(yǎng)精種玉湯組比較，右歸丸組大鼠原始卵泡比例高、閉鎖卵泡比例低，AMH水平高（P均<05）。結論 3 月齡SD大鼠每日以100mg/kg的BPA灌胃可成功制備DOR動物模型，以方測證表明該動物模型的中醫(yī)證候屬性為腎陽虛型。