HBV乙肝新小鼠模型1.1X 久顯著地降低小鼠肝臟乙肝表面抗原和核心抗原水平

發(fā)布時(shí)間：

2022-02-24

來源：

專業(yè)提供(ATCC,DSMZ,RCB,JCRB細(xì)胞庫源細(xì)胞、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、CRO服務(wù)、SCI潤(rùn)色)

作者：

吉妮歐

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研究人員設(shè)計(jì)的HBV1.1X模型是首個(gè)可調(diào)節(jié)creo的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型，具有模擬慢性HBV感染價(jià)值，具有新生兒對(duì)HBV抗原的表達(dá)和耐受性，可按需來調(diào)節(jié)HBV表達(dá)

　　乙肝病毒只能自然感染人類和黑猩猩，由于缺乏合適的小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，導(dǎo)致更為有效的HBV新療法開發(fā)受限。美國德克薩斯兒童醫(yī)院、休斯頓衛(wèi)理公會(huì)醫(yī)院等研究人員介紹，開發(fā)了新的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型可以模擬慢性HBV感染，永久顯著地降低小鼠肝臟乙肝表面抗原和核心抗原水平。

　　乙肝新HBV小鼠模型1.1X，美國科學(xué)家設(shè)計(jì)，永久顯著降低表面抗原
　　從前沿科學(xué)角度，已有科學(xué)家開發(fā)出包含一個(gè)完整的超長(zhǎng)1.3mer構(gòu)建的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型。但是，該模型缺乏共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA），即乙肝病毒的外體轉(zhuǎn)錄模板，并且由于乙肝病毒整合在每個(gè)細(xì)胞中，導(dǎo)致HBV無法治愈。已有模型中，主要將HBV基因組整合到小鼠染色體，但這種模型并無法治愈HBV小鼠。
　　研究人員介紹，研究人員開發(fā)了一種新的轉(zhuǎn)基因小鼠模型，允許乙肝病毒從小鼠染色體中切除，形成一個(gè)重組環(huán)狀DNA分子，類似于天然的環(huán)狀乙肝病毒基因組。在這些小鼠中，乙肝病毒表達(dá)實(shí)現(xiàn)了降低，在這個(gè)新小鼠模型中使功能性治愈成為可能。吉妮歐介紹一下，美國研究人員的制備方法與科學(xué)性：前面提到，動(dòng)物模型研究困難需要解決2個(gè)問題，一個(gè)是cccDNA，一個(gè)則是HBV整合細(xì)胞。

　　研究人員制作了一個(gè)新的轉(zhuǎn)基因小鼠（命名為：HBV1.1X），它使用了Cre/LoxP技術(shù)生成一個(gè)可以切除的循環(huán)HBV基因組。模型具有敲入ROSA26基因座的HBV1.1-mer盒式表達(dá)，被設(shè)計(jì)用來從出生開始穩(wěn)定表達(dá)病毒蛋白，這就像目前的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型，在基因組切除和引入Cre重組酶之前完成。研究人員的目標(biāo)是設(shè)計(jì)一個(gè)小鼠模型，HBV蛋白可以從一個(gè)整合的基因組中表達(dá)，然后，在這個(gè)整合的HBV基因組中可以被切除并形成rcccDNA。
　　切除的rcccDNA不會(huì)擴(kuò)增，因?yàn)樵谛∈笾腥狈ccDNA的形成，伴隨時(shí)間推移可以導(dǎo)致肝細(xì)胞有絲分裂的緩慢丟失。為了實(shí)現(xiàn)以上這些目標(biāo)，研究人員試圖模擬目前使用的HBV超長(zhǎng)1.3 mer基因組，旨在促進(jìn)所有的病毒蛋白生產(chǎn)。該超長(zhǎng)區(qū)域復(fù)制了部分HBV x蛋白（HBx）的ORF，因此，在HBx蛋白中尋找可以耐受的處理位置。

　　研究人員選擇了一個(gè)肽插入策略，來避免刪除對(duì)HBx功能至關(guān)重要的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域，因?yàn)樵贚oxP位點(diǎn)額外發(fā)現(xiàn)的12個(gè)氨基酸，只會(huì)在蛋白質(zhì)中形成一個(gè)額外的環(huán)或連接體，而不會(huì)引起干擾產(chǎn)生。HBx中轉(zhuǎn)錄反式激活所需的兩個(gè)蛋白基序之間的區(qū)域，但在聚合酶編碼序列結(jié)束后和增強(qiáng)子II區(qū)域開始前，研究人員找到了一個(gè)合適的靶點(diǎn)。
　　結(jié)果表明，通過病毒或轉(zhuǎn)基因Cre在HBV1.1X小鼠中，可以表達(dá)誘導(dǎo)重組cccDNA（rcccDNA）的形成，并在小鼠中通過Cre調(diào)節(jié)乙肝表面抗原（HBsAg）和核心抗原（HBc）表達(dá)。誘導(dǎo)的Cre，能夠顯著下調(diào)HBV整體基因組的HBsAg基線水平。為了證明從HBV1.1X小鼠中清除HBV，研究人員給藥表達(dá)Cre的腺病毒，通過rcccDNA切除和隨后的免疫應(yīng)答觀察到，永久性地顯著降低了小鼠肝臟中的乙肝表面抗原與乙肝核心抗原水平。

　　綜上所述，美國研究人員結(jié)論：研究人員設(shè)計(jì)的HBV1.1X模型是首個(gè)可調(diào)節(jié)creo的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型，具有模擬慢性HBV感染價(jià)值，具有新生兒對(duì)HBV抗原的表達(dá)和耐受性，可按需來調(diào)節(jié)HBV表達(dá)。簡(jiǎn)單的講，吉妮歐對(duì)美國科學(xué)家開發(fā)設(shè)計(jì)的這項(xiàng)新動(dòng)物模型做一個(gè)解釋：以往科學(xué)界已經(jīng)開發(fā)出了HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型，但這些模型還無法解決cccDNA或整合細(xì)胞，這項(xiàng)研究設(shè)計(jì)的是一個(gè)新轉(zhuǎn)基因小鼠模型；
　　它能夠允許HBV從小鼠染色體中切除。乙肝病毒的整合特性，阻止了以往模型治愈HBV，所以，研究人員設(shè)計(jì)了這種新轉(zhuǎn)基因小鼠和HBV基因組切除方法。這種方法名為Cre/LoxP技術(shù)，它可以有效地將整合的HBVDNA轉(zhuǎn)化為類似HBV cccDNA的重組環(huán)狀基因組。再將腺病毒（Ad-Cre）注射到研究人員的HBV轉(zhuǎn)基因小鼠中，發(fā)現(xiàn)可以消除HBV蛋白產(chǎn)生，并且誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答。