腫瘤模型之小鼠模型介紹及構(gòu)建、傳代、試驗(yàn)等細(xì)胞詳細(xì)講解

發(fā)布時(shí)間：

2022-02-14

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腫瘤模型我們一般常用的就是小鼠模型和人腫瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外還有腹水（或者尾靜脈注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他們了

　　腫瘤模型(推薦閱讀：嚙齒動(dòng)物腫瘤模型)我們一般常用的就是小鼠模型（推薦閱讀：同源小鼠腫瘤模型）和人腫瘤裸小鼠移植瘤模型。其中用得最多的是皮下模型，另外還有腹水（或者尾靜脈注射）以及原位模型，其他的模型很少用，就不提他們了。　　小鼠模型分三大類：
　　第一類是以S180、EAC、H22等為代表的，他們的宿主小鼠多選用KM，可產(chǎn)生腹水，也可在皮下成瘤。
　　多以腹水傳代，實(shí)驗(yàn)時(shí)抽取腹水，經(jīng)過(guò)一定稀釋后皮下接種構(gòu)建模型，接踵后第二天開始給藥，給藥7到10天，接種10天后結(jié)束試驗(yàn)，剝?nèi)∧[瘤稱瘤重。
　　1. 關(guān)于構(gòu)建瘤種
　　可以用體外細(xì)胞株培養(yǎng)后，用PBS懸浮至1~3×106/0.1ml/mouse，i.p接種即可，最好用6號(hào)左右的針頭，就是常用的2ml一次性注射的針頭。
　　2. 關(guān)于腹水傳代
　　觀察到第一代的種鼠肚子較大后（一般約8~9天左右），可以傳代，傳代時(shí)取1ml注射器，用2ml注射器的針頭，種鼠腹部消毒后直接將針頭插入抽取腹水即可，注意不要把針頭插得很深，盡量淺一點(diǎn)，還可以把老鼠拎起來(lái)，利用重力，讓腹水集中在某處便于抽取，一般抽個(gè)0.5ml就可以了，不用離心。
　　直接用PBS3~6倍稀釋后，接種到新的老鼠腹腔，腹水顏色為白色或者略有發(fā)黃都是正常的，但是血性腹水說(shuō)明不好，需要注意調(diào)整，第二代以后，盡量6~7天的時(shí)候傳代，不要等的時(shí)間太久，否則腹水容易血性。三代后可用于試驗(yàn)。
　　3. 關(guān)于接種進(jìn)行試驗(yàn)
　　這個(gè)時(shí)候抽取的腹水需要量比較多，一般需要處死種鼠后，小心地用消毒眼科剪刀鑷子剝開腹部皮膚，注意不要弄破肌肉，然后，用鑷子（最好是哪種前面有倒勾的鑷子，學(xué)名好像是唇型鑷）拎起腹部的肌肉，用剪刀剪開一個(gè)小口，然后用玻璃滴管或者去掉針頭的注射器吸取腹水。
　　然后進(jìn)過(guò)一定的稀釋后，接種到小鼠的腋下。關(guān)于稀釋量，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的情況都不一樣，最好摸索一下，開始的時(shí)候可以適當(dāng)?shù)挠?jì)數(shù)，但是要用臺(tái)盼蘭染色后計(jì)活細(xì)胞數(shù)。接種部位在小鼠腋下，但是不要深入到腋窩里面，會(huì)給以后的操作帶來(lái)麻煩。接種時(shí)的進(jìn)針處離接種處遠(yuǎn)一點(diǎn)，讓針頭在皮下多走一段，不容易污染。
　　有的人接種的時(shí)候喜歡針頭向上用力，緊貼著表皮往里走，然后注射的時(shí)候感覺阻力較大，打出來(lái)的皮丘又緊又圓，這樣的接種，會(huì)使腫瘤與皮膚嚴(yán)重粘連，不利于最后腫瘤的剝?nèi)　Ｒ膊灰o靠肌肉，腫瘤會(huì)與肌肉嚴(yán)重粘連。應(yīng)該在兩者之間，進(jìn)針的感覺輕松自如，針頭很自由，雖然打出來(lái)的腫瘤不會(huì)很圓很漂亮，但是相對(duì)好剝?nèi)∫恍?br /> 　　4. 關(guān)于觀測(cè)指標(biāo)
　　主要是按時(shí)稱體重，試驗(yàn)結(jié)束后剝?nèi)∧[瘤稱瘤重。因?yàn)槌隽鲆呀?jīng)是接種后的第6天左右了，第10天就結(jié)束時(shí)間，瘤體積的數(shù)據(jù)意義就不大。小鼠腫瘤很難剝，這是沒有辦法的，只能耐心，沒有太好的辦法，剝多了以后，手上會(huì)掌握一些巧力，有一些幫助，但是我們還是很頭痛小鼠腫瘤試驗(yàn)結(jié)束。腫瘤組織周圍經(jīng)常會(huì)有一些血竇的形成，弄破后會(huì)有血和黃色的液體流出，正常的，但是剝瘤子的時(shí)候不要把它弄破，會(huì)嚴(yán)重影響瘤重。按照SFDA的規(guī)定，平均瘤重小于1g，或者單個(gè)瘤重小于200mg，認(rèn)為腫瘤生長(zhǎng)不良，試驗(yàn)作廢。
　　小鼠模型第二類是以lewis肺癌、B16為代表的，他們的宿主多為C57。
　　不產(chǎn)生腹水，只能皮下生長(zhǎng)。多用插塊法或者勻漿法傳代和接種做試驗(yàn)。有一種做法也是接種后第二天開始給藥，還有一種做法是接種三天后給藥，接種后兩周結(jié)束試驗(yàn)，剝?nèi)∧[瘤稱重。
　　1. 關(guān)于瘤種構(gòu)建
　　體外細(xì)胞株，培養(yǎng)后PBS懸浮至1~3×106/0.1ml/site，接種至小鼠腋下，即可。
　　2. 關(guān)于傳代與接種
　　剝?nèi)∧[瘤，在PBS中取出腫瘤表面包膜和中心的壞死部分，剪刀剪成小塊，小塊大小以套管針的針口為標(biāo)準(zhǔn)。用鑷子將小塊從針頭處塞進(jìn)18~20號(hào)的套管針，接種至小鼠腋下，用套管針中間的實(shí)體針將瘤塊推出即可。
　　還可以在上述腫瘤組織剪成小塊后，用玻璃勻漿器勻漿后，200目篩網(wǎng)過(guò)濾，收集濾液，活細(xì)胞計(jì)數(shù)，PBS稀釋后用注射器接種，稀釋量也需要各個(gè)實(shí)驗(yàn)室自己摸索。
　　也是三代后可用于試驗(yàn)。
　　3. 關(guān)于觀測(cè)指標(biāo)
　　可以在出瘤后測(cè)量瘤體積，但是主要還是考察瘤重。
　　小鼠模型第三類是以P388、L1210為代表的白血病模型。
　　宿主為DBA2，也有人用C57與DBA2的F1代傳代，DBA2用于試驗(yàn)，但是我們兩種宿主都傳過(guò)代，沒有發(fā)現(xiàn)有什么區(qū)別。他們能形成腹水，一般不用于皮下接種試驗(yàn)，平時(shí)多用腹水傳代，實(shí)驗(yàn)時(shí)多用腹腔接種或尾靜脈接種考察生存時(shí)間。也是接種后第二天開始給藥。