溫針灸對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型表達(dá)的影響明確溫針灸抑制軟骨細(xì)胞過(guò)度凋亡的途徑

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2022-06-30

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實(shí)驗(yàn)基于PI3K/Akt 信號(hào)通路，觀(guān)察溫針灸對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型 PI3K、Akt、Bcl-2、Bax 的表達(dá)的影響，明確溫針灸抑制軟骨細(xì)胞過(guò)度凋亡的途徑

　　摘要
　　膝骨關(guān)節(jié)炎是由各種原因?qū)е萝浌羌?xì)胞過(guò)度凋亡使正常軟骨細(xì)胞數(shù)量減少、關(guān)節(jié)軟骨自我修復(fù)受損，造成關(guān)節(jié)軟骨損傷的一種退行性骨關(guān)節(jié)病。（推薦閱讀：膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)嚙齒動(dòng)物模型、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)模型、膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎（CIA）嚙齒動(dòng)物模型、骨關(guān)節(jié)炎模型）
　　在正常穩(wěn)態(tài)下，軟骨細(xì)胞的增殖和凋亡處于平衡狀態(tài)，起到維持軟骨結(jié)構(gòu)與功能穩(wěn)定的作用。當(dāng)軟骨細(xì)胞過(guò)度凋亡時(shí)，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)被打破，軟骨損傷加劇，導(dǎo)致膝骨關(guān)節(jié)炎的加速發(fā)展。
　　研究表明溫針灸治療膝骨關(guān)節(jié)炎的療效確切，可改善軟骨細(xì)胞凋亡狀態(tài)4，但其作用途徑不明確。P13K/Akt 信號(hào)通路對(duì)調(diào)控細(xì)胞凋亡發(fā)揮著重要作用5，該信號(hào)通路的激活及其下游因子Bcl-2、Bax表達(dá)的變化是影響軟骨細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵問(wèn)。
　　因此，此次實(shí)驗(yàn)基于PI3K/Akt 信號(hào)通路，觀(guān)察溫針灸對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型 PI3K、Akt、Bcl-2、Bax 的表達(dá)的影響，明確溫針灸抑制軟骨細(xì)胞過(guò)度凋亡的途徑。
　　背景
　　溫針灸臨床治療膝骨關(guān)節(jié)炎療效顯著，但基礎(chǔ)治療機(jī)制尚未明確。
　　目的
　　觀(guān)察溫針灸對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型關(guān)節(jié)軟骨中PI3K/Akt信號(hào)通路及其下游因子Bcl-2、Bax表達(dá)的影響。
　　方法
　　取6月齡新西蘭兔40只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組、模型組、藥物組、溫針灸組，每組10只。模型組、藥物組、溫針灸組兔右后肢膝關(guān)節(jié)伸直位以石膏管型固定4周，制備膝骨關(guān)節(jié)炎模型。造模成功后，模型組每日置于兔架上固定15 min，藥物組每天行硫酸氨基葡萄糖灌胃治療（77mg/kg，1次/d），溫針灸組每天行溫針灸治療（15 min/次，1次/d）。連續(xù)治療28 d后，利用蘇木精-伊紅染色觀(guān)察軟骨損傷程度，Tunel法檢測(cè)軟骨細(xì)胞凋亡，RT-PCR法檢測(cè)軟骨組織中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表達(dá)，Western blot法檢測(cè)軟骨組織中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果
　?、偬K木精-伊紅染色顯示，模型組軟骨細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞排列無(wú)序，層次紊亂，軟骨面被破壞，Mankin評(píng)分顯著升高;藥物組與溫針灸組軟骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多，基質(zhì)著色深，Mankin評(píng)分降低
　?、谂c正常組相比，模型組軟骨細(xì)胞凋亡率增高（P<0.05）; 與模型組相比，藥物組、溫針灸組軟骨細(xì)胞凋亡率降低（P< 0.05）
　　③RT-PCR與Western blot檢測(cè)顯示，與正常組相比，模型組PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA與蛋白表達(dá)降低（P<0.05），Bax的mRNA與蛋白表達(dá)升高（P<0.05）∶與模型組相比，溫針灸組與藥物組PI3K、Akt、Bd-2的mRNA與蛋白表達(dá)升高（P<0.05），Bax的mRNA與蛋白降低（P<0.05）
　?、芙Y(jié)果表明溫針灸可通過(guò)調(diào)控PI3K/Akt信號(hào)通路引起下游因子Bc-2表達(dá)升高、Bax表達(dá)降低，進(jìn)而抑制軟骨細(xì)胞過(guò)度凋亡，達(dá)到保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨的作用。
　　關(guān)鍵詞∶膝骨關(guān)節(jié)炎;溫針灸;軟骨細(xì)胞凋亡;PI3K/Akt信號(hào)通路;下游因子